諾博萊德  Fluo-4,，AM 鈣熒光探針Fluo-4，AM

Fluo-4,，AM 鈣熒光探針   細(xì)胞功能檢測

產(chǎn)品貨號：F6388

產(chǎn)品名稱：Fluo-4,，AM 鈣熒光探針Fluo-4，AM

英文名稱：Fluo-4,，AM

產(chǎn)品規(guī)格：100ug/1mg/10*100ug

產(chǎn)品簡介：

別名：鈣熒光探針Fluo-4, AM

分子式：C₅₁H₅₀F₂N₂O₂₃

分子量：1096.94

外觀(性狀)：凍干粉（橙紅色）

激發(fā)波長/發(fā)射波長(Ex/Em)：494/516

儲存條件：-20℃干燥避光保存,，有效期1年。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderF6388 Fluo-4,，AM 鈣熒光探針Fluo-4,，AM是一種將Fluo-3 結(jié)構(gòu)中的Cl替換成F的鈣熒光探針。由于將Cl替換成了電子吸引力更強(qiáng)的F,，它的最大激發(fā)波長會向短波長處偏離10nm左右,。這個(gè)波長更接近于氬激光器的波長，所以用氬激光器激發(fā)時(shí),，F(xiàn)luo-4的熒光強(qiáng)度比Fluo-3強(qiáng)一倍,。

Fluo-4, AM 穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-4，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi),，F(xiàn)luo-4若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的,，但是當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，最大激發(fā)波長為494nm,，最大發(fā)射波長為516nm,。可以使用激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化,。

操作說明：（forHumanTcells）

1,，試劑

2 mM 的Fluo-4,AM/DMSO （將1mgFluo-4,AM 溶于442µLDMSO ）

Pluronic F127

Hanks balanced salt solution（HBSS）：建議使用不含鈣鎂、不含酚紅的HBSS

HEPES buffer saline（10mM HEPES,，1mM Na2HPO4,，137mMNaCl，5mMKCl,， 1mMCaCl2,， 0.5mMMgCl2，5mMGlucose,，0.1%BSA,，pH7.4 ）

2,，操作

（1）向Fluo-4,AM/DMSO 溶液中加入16.5mgPluronicF127，Pluronic F127 可以防止 Fluo-4,AM 在 HBSS 中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞,。

（2）用HBSS 稀釋Fluo-4,AM 溶液,，制備4µM 的Fluo-4,AM 工作液。

（3）將Fluo-4,AM 工作液加入細(xì)胞,，在37℃培養(yǎng)20分鐘,。

（4）加入5 倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS，再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘,。

（5）用HEPES buffersaline 洗滌細(xì)胞 3 次,，然后用HEPESbuffersaline 使細(xì)胞重懸浮，制成1×105cells/mL 的溶液,。

（6）37 ℃下培養(yǎng)10分鐘,，然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測。激發(fā)波長494nm,，發(fā)射波長516nm ,。

注意：標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，在每次實(shí)驗(yàn)前,，請先確定最佳條件,。以上方法僅供參考。

Fluo-4,，AM 鈣熒光探針   細(xì)胞功能檢測

產(chǎn)品訂購信息

F6388 Fluo-4,，AM 鈣熒光探針Fluo-4，AM  100ug/1mg/10*100ug