NobleRyder H6869 潮霉素B（干粉），濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉,，Hygromycin B

產(chǎn)品貨號(hào)：H6869

產(chǎn)品名稱：潮霉素B（干粉）,，濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉，Hygromycin B

產(chǎn)品規(guī)格：1g

潮霉素B干粉 農(nóng)桿菌培養(yǎng)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

別名：濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉

英文名稱：Hygromycin B

CAS：31282-04-9

儲(chǔ)存條件：-20℃,，有效期4年

規(guī)格：1g

外觀(性狀)：白色至淺黃色固體

純度：＞90%

來(lái)源：放線菌發(fā)酵產(chǎn)品

酶活/效價(jià)：≥950U/mg

溶解性：100mg/ml in Water

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder H6869 潮霉素B（干粉）,，濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉，Hygromycin B

產(chǎn)品介紹

本品是潮霉素B干粉,，用于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)溶解后過(guò)濾除菌,。推薦溶劑水，PBS溶液,。

說(shuō)明：蛋白質(zhì)合成抑制劑,，可用于植物細(xì)胞培養(yǎng)等生化研究。

潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,，通過(guò)干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成,，從而殺死原核（如細(xì)菌）、真核（如酵母菌,，真菌）和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞,。

大腸桿菌（ Escherichia coli.）來(lái)源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶,，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物,，從而起到解毒作用。針對(duì)這一原理,，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記,，用來(lái)篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。另外,，由于作用模式的差異,，常與G418,，Zeocin和Blasticidin S聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽(yáng)性細(xì)胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑,，因其選擇性滲透進(jìn)入因病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞，且具有抑制翻譯的功效,。還可混合入動(dòng)物飼料中起到驅(qū)蟲(chóng)功能,。

使用方法

1. 常用篩選濃度

注意：潮霉素B用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基,，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve）,，即劑量反應(yīng)性曲線,，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言,，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL,；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL,。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素最di濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn),，至少選擇5個(gè)濃度,。

1） 第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃,，CO2培養(yǎng)過(guò)夜,；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量,。

2） 根據(jù)細(xì)胞類型,，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,，可設(shè)定50,，100，250,，500,，750，1000μg/mL,。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3） 第二天：替換舊的培養(yǎng)基,，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基,。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4） 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5） 按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度,。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的最di濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度,。

3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1） 轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）,。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效guo最hao,。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低,。為了得到較好的篩選xiao果,，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%。

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。

3） 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,，這取決于宿主細(xì)胞類型,，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果,。

4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。

注意事項(xiàng)

1） 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來(lái)自E. Coli.之外,，還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae,。

2） 本品為有毒化合物,，避免與皮膚和眼睛接觸，請(qǐng)小心操作,。

3） 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

備注：產(chǎn)品信息可能會(huì)有優(yōu)化升級(jí),。請(qǐng)以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn),。

潮霉素B干粉 農(nóng)桿菌培養(yǎng) 

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