諾博萊德 OrigamiB(DE3)plysS 感受態(tài)細胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

OrigamiB(DE3)plysS 感受態(tài)細胞 載體構(gòu)建

產(chǎn)品貨號：C1508

產(chǎn)品名稱：OrigamiB(DE3)plysS 感受態(tài)細胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

英文名稱：OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

產(chǎn)品規(guī)格：20*100ul

產(chǎn)品簡介：

外觀(性狀)：干冰運輸,，單加10kg干冰費

儲存條件：-70℃

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyderC1508 OrigamiB(DE3)plysS 感受態(tài)細OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell W3110(DE3)來源于K-12菌株,，細菌的染色體DNA上整合了T7 RNA聚合酶(T7RNP)表達框原件，T7RNP位于lacUV5啟動子下,，可表達T7 RNA聚合酶,。pET、pGEX,、pMAL等原核表達載體可使用該菌株進行外源重組蛋白的表達,。W3110(DE3)感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率大于1×106 cfu/μg DNA,。

操作步驟：  

1. 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟

1) 將感受態(tài)細胞置于冰水浴中化凍,。待細胞剛化凍后，加入目的質(zhì)粒到細胞中,，用手指bo打管底,，輕輕混勻；

2) 冰水浴中放置30分鐘,，不要晃動,；

3) 42℃熱擊60秒鐘，不要晃動,；

4) 冰水浴中放置2分鐘,，不要晃動；

5) 加入500μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基,；

6) 置于37℃搖床中,，150-200rpm震蕩復(fù)蘇培養(yǎng)60分鐘；

7) 取50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上,。待液體吸干后,，倒置平板,，37℃培養(yǎng)12-16小時。

（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后,，12000rpm離心30秒鐘,，棄掉上清，留100μl左右的液體,，用200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊,，取10μl重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭,，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線,。這個方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）

（質(zhì)?？焖俎D(zhuǎn)化步驟：將步驟2的時間縮短到5分鐘,，對于氨芐青mei素抗性的質(zhì)粒，步驟4完成后,，可直接涂布或劃線于含氨芐青mei素抗性的LB平板上,。其它抗性的質(zhì)粒仍需60分鐘的復(fù)蘇培養(yǎng)。）

2. 蛋白表達步驟

1) 挑取單菌落,，接種到含5ml帶抗生素的LB培養(yǎng)基中,；

2) 37℃，200rpm震蕩培養(yǎng)細菌至對數(shù)生長期（OD600=0.4-0.8）,；

3) 加入IPTG到終濃度為0.4mM,，37℃誘導(dǎo)2-4小時或16℃誘導(dǎo)過夜；

4) 誘導(dǎo)完成后,，離心收集菌體,，用合適的方法（如考馬斯亮藍染膠法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌體裂解物的總蛋白,、上清和沉淀組分,，明確表達產(chǎn)物的表達狀況（可溶性或不溶性表達）；

5) 大量表達時,，可用10ml過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到1L培養(yǎng)基中，當培養(yǎng)到OD600=0.4-0.8時,，加入終濃度為0.4mM的IPTG,，37℃誘導(dǎo)2-4小時或16℃誘導(dǎo)過夜（不同蛋白表達的優(yōu)良條件有所不同，需在實驗中優(yōu)化）,。

注意事項：

1. 我司生產(chǎn)的生化試劑如無特殊標注,，基本為非無菌包裝，若用于細胞實驗,，請?zhí)崆白龊妙A(yù)處理,。

2. 一旦配成溶液,，請分裝保存，避免反復(fù)凍融造成的產(chǎn)品失效,。

3. 本產(chǎn)品僅供科研使用,。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,，食品及化妝品等用途,。請勿存放于普通住宅區(qū)。

4. 為了您的安全和健康,，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作,。

OrigamiB(DE3)plysS 感受態(tài)細胞 載體構(gòu)建

產(chǎn)品訂購信息

C1508 OrigamiB(DE3)plysS 感受態(tài)細胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell  20*100ul