諾博萊德 TOP 10感受態(tài)細胞E.coli TOP 10 Competent Cells

TOP 10感受態(tài)細胞E.coli    載體構建

產(chǎn)品貨號：C9088

產(chǎn)品名稱：TOP 10感受態(tài)細胞E.coli TOP 10 Competent Cells

英文名稱：E.coli TOP 10 Competent Cells

產(chǎn)品規(guī)格：20*100ul/10*100ul

產(chǎn)品簡介：

外觀(性狀)：干冰運輸,，單加10kg干冰費

儲存條件：液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個月

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyderC9088 TOP 10感受態(tài)細胞E.coli TOP 10 Competent Cells是采用大腸桿菌TOP 10菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,，可用于DNA的化學轉化,。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108,，-70℃保存六個月轉化效率不發(fā)生改變,。

基因型：F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

特點：一種用于鋪制與培養(yǎng)質粒平板和粘粒平板的重級缺陷的抑制型菌株。其中φ80 lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α-互補,，可用于藍白斑篩選,。該菌株適用于高效的DNA克隆和質粒擴增，能保證高拷貝質粒的穩(wěn)定遺傳,。

操作方法：（以下各步驟均為無菌操作）

1,、將感受態(tài)細胞置于冰上融化，以下實驗以100ul感受態(tài)細胞為例,。

2,、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一,，輕輕旋轉離心管以混勻內容物,，冰浴放置30分鐘。

3,、將離心管置于42℃水浴中60-90秒,，然后快速轉移到冰浴中放置2-3分鐘，注意不要搖動離心管,。

4,、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃180rpm振蕩培養(yǎng)1小時,。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,，使菌體復蘇,。

5、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板,，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調整,，如轉化的DNA總量較多,，可取100ul左右的轉化產(chǎn)物涂板；反之,，如轉化的DNA總量較少,，可取200-300ul的轉化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長,。如果預計的克隆較少,，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中,。涂布剩余的菌液可4℃保存,，如果次日的轉化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項：

1,、感受態(tài)細胞應保存在-70℃,，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低,。

2,、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染,，避免為以后的篩選,、鑒定帶來影響。

3,、轉化時,，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率,。轉化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一,。

4、轉化率的計算：轉化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量,。

5,、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物,，以重新轉化,，將損失降到*低。

TOP 10感受態(tài)細胞E.coli    載體構建

產(chǎn)品訂購信息

C9088 TOP 10感受態(tài)細胞E.coli TOP 10 Competent Cells  20*100ul/10*100ul