NobleRyderBC1698 Caspase-1活性檢測(cè)試劑盒Caspase-1 Activity Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC1698

產(chǎn)品名稱：Caspase-1活性檢測(cè)試劑盒Caspase-1 Activity Assay Kit

英文名稱：Caspase-1 Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T/20T

Caspase-1活性檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞凋亡

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

檢測(cè)方法：比色法 Colorimetric

儲(chǔ)存條件：Store at -20℃,，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderBC1698 Caspase-1活性檢測(cè)試劑盒Caspase-1 Activity Assay Kit是參與細(xì)胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含 10多個(gè)成員,。Caspase-1是唯 yi可剪切 Ⅱ-1b 和Ⅱ-18 前體產(chǎn)生活性細(xì)胞因子的 caspase,。Caspase-1通過剪切 BcI-XL 調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，并通過對(duì)細(xì)胞因子前體的剪切來調(diào)控相關(guān)細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫炎性反應(yīng),。

基于 Caspase-1 特異水解多肽底物Tyr-Val-Ala-Asp-3-nitroanilide (YVAD-pNA),，釋放的游離xiao基苯胺pNA 在405nm 有最大吸收峰。采用可見光光度比色法測(cè)定pNA而得到Caspase 活性,。適用于檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織,、細(xì)胞Caspase-1活性,。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、100mL 玻璃比色皿/96孔板,、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器,、研缽/勻漿器,、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一,、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn))

1、培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)胞到離心管,，離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(約106個(gè))加100L試劑二(若裂解不充分可提高至 150-200L),震蕩重懸沉淀,，置冰上靜置15 min,15000g4℃離心10-15min,取上清置冰上待測(cè)。

2,、組織:按照組織質(zhì)量(g)：試劑二體積(mL)為1:5-10的比例(建議稱取約 0.1g組織,，加入1mL 試劑二)，冰浴研磨或充分剪碎,，置冰上靜置15min,，4℃，15000g離心10-15min,，取上清置冰上待測(cè),。

測(cè)定步驟

1、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 405 nm,，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2,、標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:將5mmolpNA 標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋至 200,、100、50,、25,、12.5、0umol 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用,。

注意事項(xiàng):

1,、由于試劑二中含有還原劑(DTT)，建議將樣品用水稀釋2倍后,，用Bradford 法測(cè)定蛋白濃度,，以降低 DTT對(duì)蛋白濃度測(cè)定的干擾。不建議使用BCA法測(cè)定蛋白濃度,。

2,、Caspase 活性測(cè)定值低最常見的原因是細(xì)胞未發(fā)生凋亡或細(xì)胞量太少,，其次是觀測(cè)時(shí)間不恰當(dāng)。誘導(dǎo)凋亡時(shí),，并非劑量越大時(shí)間越長(zhǎng) Caspase 活性就越高,。建議設(shè)置不同劑量和時(shí)間點(diǎn)如 0、2,、4,、8、16,、24小時(shí),，以檢測(cè)優(yōu)良的觀察點(diǎn)。

3,、所測(cè)樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限shi,，可用試劑二稀釋樣本后重新測(cè)定。

4,、蓋緊 96孔板蓋子并用封口膜密封,。37℃孵育，肉眼可見顏色變黃時(shí)的 OD405值約為0.2,，此時(shí)即可測(cè)定,。顏色變化不明顯可延長(zhǎng)反應(yīng)或過夜，但酶活性較強(qiáng)時(shí),，孵育時(shí)間過長(zhǎng)將導(dǎo)致反應(yīng)失去線性關(guān)系,。

Caspase-1活性檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞凋亡 

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

BC1698 Caspase-1活性檢測(cè)試劑盒Caspase-1 Activity Assay Kit  50T/100T/20T