諾博萊德 溶酶體蛋白提取試劑盒

NobleRyder  EX9018 溶酶體蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：EX9018

產(chǎn)品名稱(chēng)：溶酶體蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T /100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱(chēng)：溶酶體蛋白提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲(chǔ)存條件：2-8℃,，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder  EX9018 溶酶體蛋白提取試劑盒產(chǎn)品介紹

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞/組織

產(chǎn)品介紹

溶酶體是由一層單位膜包圍,，內(nèi)含多種酸性水解酶的泡狀結(jié)構(gòu)。溶酶體含有 40 多種水解 酶,，其中包括蛋白酶,、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是對(duì)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的消化作用,。此 外溶酶體與器官形成,、激素分泌的調(diào)節(jié)以及某些疾病的發(fā)生密切相關(guān),。

溶酶體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，可用于各種動(dòng)物細(xì)胞和實(shí)體 軟,、硬組織樣本的溶酶體蛋白提取,。適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織，如腦,、 脊髓,、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪,、肝臟,、消化道、腎臟,、心臟,、肌肉、血管,、結(jié)締組織等動(dòng)物組 織中提取溶酶體總蛋白,。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,，阻 止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解,，為提取高純度的蛋白提供了保證。 

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting,、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀,、ELISA,、轉(zhuǎn)錄活性 分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn),、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn),。 

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

使用前請(qǐng)注意：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存,。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存,。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,，變成液體狀態(tài) 后離心至管底部再開(kāi)蓋,。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

自備試劑和儀器：

離心機(jī),、振蕩器,、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器,、移液器,、冰箱,、冰盒，PBS緩沖液,、蛋白定量試劑盒,， 離心管、吸頭,、一次性手套,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便，從細(xì)胞,，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨,、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理,。

2. 提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便,。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定,。

4. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),，背景干擾低。

5. 總蛋白提取液含多種有效成分,，可以充分釋放胞漿蛋白,、核蛋白和膜蛋白,，又可結(jié)合釋出的蛋白防止 沉淀,。

6. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化,。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白 酶抑制劑AEBSF,、Aprotinin,、Leupeptin、PepstatinA,、Bestatin,、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某 一種或幾種蛋白酶活性,。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,，包括si氨酸 蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶,、丙氨酰-氨基肽酶等。

操作步驟：

一,、使用注意事項(xiàng)

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),，以?xún)?yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,，避免開(kāi)蓋時(shí)試 劑損失,。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷,。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫,。

4. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用,，溶解后正常使用,。

5. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液,。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品,。

7. 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制 劑,，注意提取過(guò)程保持低溫操作,，縮短離心時(shí)間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用,，否則會(huì)影響使用效果,。

9. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

二,、溶酶體蛋白提取

提取液準(zhǔn)備：

每200μL冷的蛋白提取液C中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物,，混勻后置冰上備用。

細(xì)胞溶酶體蛋白提取

1. 取1-2×107個(gè)細(xì)胞,，在4℃,，500×g條件下離心2-3min，小心吸取培養(yǎng)基,，盡可能吸干,，收集細(xì)胞。

2. 用冷PBS洗滌兩次,，每次洗滌后盡可能吸干上清,。

3. 加入500μL-1000μL冷的試劑A,，置冰上振蕩10min,。

4. 用Dounce勻漿器勻漿30-40下。

5. 在4℃,，1000×g條件下離心5min,，棄沉淀，留上清,。

6. 將上清在4℃,，4000×g條件下離心10min，棄沉淀，留上清,。

7. 將上清在4℃,，20000×g條件下離心20min，棄上清,，留沉淀,。

8. 在沉淀中加入500μL冷的試劑B，混勻,。

9. 在4℃,，20000×g條件下離心20min，棄上清,，留沉淀,。

10. 在沉淀中加入100-200μL蛋白提取液C，充分混勻,。

11. 輕微振蕩15-30min,。

12. 在4℃，12000×g條件下離心15min,。

13. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,，即得到溶酶體總蛋白。

14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn),。

組織溶酶體蛋白提?。?

1. 取50-100mg新鮮動(dòng)物組織樣本，用PBS洗滌干凈,。

2. 用剪刀盡可能剪碎,，用冷PBS洗滌兩次。

3. 加入500μL-1000μL冷的試劑A,，置冰上10min,。

4. 用Dounce勻漿器勻漿30-40下，至無(wú)明顯可見(jiàn)固體,。

5. 在4℃,，1000×g條件下離心5min，棄沉淀,，留上清,。

6. 將上清在4℃，4000×g條件下離心10min,，棄沉淀,，留上清。

7. 將上清在4℃,，20000×g條件下離心20min,，棄上清，留沉淀。

8. 在沉淀中加入500μL冷的試劑B,，混勻,。

9. 在4℃，20000×g條件下離心20min,，棄上清,，留沉淀。

10. 在沉淀中加入100-200μL蛋白提取液C,，充分混勻,。

11. 輕微振蕩15-30min。

12. 在4℃,，12000×g條件下離心15min,。

13. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到溶酶體總蛋白,。

14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn),。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療,。

2. 最好使用一次性吸頭,、管、瓶或玻璃器皿,，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留 清潔劑,。

3. 實(shí)驗(yàn)完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸,。

 諾博萊德 溶酶體蛋白提取試劑盒