產(chǎn)品名稱：MDCK NBL-2馬.達(dá)二氏犬腎細(xì)胞,、MDCK NBL-2馬.達(dá)二氏犬腎細(xì)胞,、MDCK NBL-2馬.達(dá)二氏犬腎細(xì)胞、MDCK NBL-2馬.達(dá)二氏犬腎細(xì)胞,；細(xì)胞介紹 1958年九月 S.H. Madin and N.B. Darby從一只外觀正常的成年雌性英國小獵犬的腎分離等到MDCK細(xì)胞株,。角蛋白免疫過氧化物酶染色呈陽性。MDCK被用于研究β-粥樣蛋白前體的處理及其蛋白水解產(chǎn)物,。 細(xì)胞特性 1） 來源：狗腎 2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣 3） 含量：>1x106 個/mL 4） 污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性 5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝 運輸和保存 可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式 （1）干冰運輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,； （2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。 （3）收到細(xì)胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系,。 細(xì)胞用途： 僅供科研使用,。 細(xì)胞接收后的處理 1） 收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。 2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時,，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度,?？醇?xì)胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照,，（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。 3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。 4） 貼壁細(xì)胞：在運輸過程中貼壁細(xì)胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長,，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）,。 5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基）,。 6） 備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。 收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 ,。 細(xì)胞培養(yǎng)步驟 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備 1） 準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗，1%,。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。 3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。 二． 細(xì)胞處理 1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。 2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法 1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。 4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 注：次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。 下面T25瓶為類,； 1，細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗一遍后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后,，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2,，4min 1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識。 3,，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。


南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內(nèi)外市場專業(yè)研發(fā),、生產(chǎn)和銷售細(xì)胞、 外泌體,、ELISA 試劑盒,、 抗體、重組蛋白及相關(guān)試劑,。產(chǎn)品在免疫學(xué),、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝,、 神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域內(nèi)都有科學(xué)文獻(xiàn)發(fā)表,，被國內(nèi)外多所大學(xué)、研究機(jī)構(gòu)和藥學(xué)平臺使用并發(fā)表文獻(xiàn)多達(dá)1000多次,。我公司憑借優(yōu)異的產(chǎn)品和完善的服務(wù) 體系現(xiàn)已受到廣大國內(nèi)外用戶的青睞和認(rèn)可。
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重組蛋白：多項發(fā)明,，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種,。


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