細(xì)胞系特征

細(xì)胞株名稱：A549/DDP人肺癌耐藥株

種屬：人

組織來源：肺癌

生長特性：貼壁生長

形態(tài)特征：上皮細(xì)胞

微生物及支原體檢測：陰性

安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。

培養(yǎng)條件：

培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+2000ng/ml DDP

血清我們推薦用:

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03,。

培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%

傳代方法：

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細(xì)胞生長情況,。

（一）如果細(xì)胞未長滿,，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作,，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng),。

(二)如果細(xì)胞已長滿,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液,，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次,。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁,，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察,，直至50-70%的細(xì)胞脫落后，加入2ml 以上培養(yǎng)基中止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中,。如果沒有特別說明,，收到細(xì)胞后的次傳代一般是一傳二。

注：1,、觀察細(xì)胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行,，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下,。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素,。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi),。

4、收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染，請及時與我們聯(lián)系,。..

凍存方法：

凍存液：90%胎牛血清,，10%DMSO

儲存：液氮儲存