親和力是評價(jià)可逆反應(yīng)過程中兩個(gè)分子間相互作用強(qiáng)弱的特征參數(shù),，是了解分子以及識別生物學(xué)過程、藥物的發(fā)現(xiàn)與篩選等的重要指標(biāo),。蛋白質(zhì)相互作用/親和力檢測可應(yīng)用于藥物早期研究開發(fā),、篩選鑒定、臨床前與臨床研究以及下游生產(chǎn)質(zhì)控等各個(gè)環(huán)節(jié),，而且在生命科學(xué)基礎(chǔ)研究,、生物制藥開發(fā)等領(lǐng)域也有應(yīng)用。業(yè)內(nèi)常用的檢測技術(shù)有表面等離子共振（Surface plasmon resonance, SPR）和生物膜干涉技術(shù)（Bio-Layer Interferometry, BLI）,。

義翹神州擁有豐富和高質(zhì)量的蛋白資源,，如Fc受體蛋白、免疫檢查點(diǎn)蛋白等,，可提供利用BLI技術(shù)（Octet儀器）和SPR技術(shù)（Biacore儀器）為客戶提供高質(zhì)量一體化的分子互作檢測服務(wù),，包括抗體篩選、活性檢測,、表位作圖,、一致性評價(jià)和質(zhì)量控制檢測服務(wù)。

Biacore/Octet親和力檢測服務(wù)范圍

SPR/BLI親和力檢測平臺

義翹神州基于Biacore平臺與ForteBio Octet 平臺為客戶提供快速準(zhǔn)確的親和力測定服務(wù),，與其他互作分析技術(shù)相比,，如ELISA,、免疫共沉淀、酵母雙雜交,，有著實(shí)時(shí),、無標(biāo)記、可檢測低親和的顯著優(yōu)-勢,，能夠?qū)崿F(xiàn)對分子間親和力的準(zhǔn)確檢測,。

我們的優(yōu)勢與能力

豐富的蛋白產(chǎn)品支持（FcRn，F(xiàn)cγR,， 靶點(diǎn)蛋白等）
義翹神州擁有豐富的蛋白資源,，全面覆蓋Fc受體蛋白、免疫檢查點(diǎn)蛋白,、細(xì)胞因子,、蛋白酶和SARS-CoV-2病毒蛋白等，為您提供高質(zhì)量一體化的分子互作檢測服務(wù),。

服務(wù)內(nèi)容

客戶提供

1. 樣品類型,、濃度,、分子量、種屬,、標(biāo)簽等信息
2. SPR：1）分析物樣品中不含有甘油,、蔗糖、咪唑等高折光的成分,；2）氨基偶聯(lián)的配體溶液中不含有tris,、NaN3等成分；3）小分子需要明確有機(jī)溶劑信息
    BLI： 1）分析物樣品中不含有高濃度的高聚物物質(zhì),，如PEG等,；2）氨基偶聯(lián)的配體溶液中不含有tris、NaN3等成分

案例分享

義翹神州擁有7000+優(yōu)質(zhì)的靶點(diǎn)蛋白,，如Fc受體蛋白、免疫檢查點(diǎn)蛋白等,，檢測中心獲得CNAS資質(zhì),，可提供抗體篩選、表征和Fc受體檢測等,，助力抗體藥IND申報(bào),。

抗體與Fc受體蛋白親和力測定

• Fc受體蛋白與抗體親和力測定（BLI）

抗體與補(bǔ)體親和力測定

• 抗體與補(bǔ)體親和力測定（BLI）

人抗體IgG1與補(bǔ)體C1q結(jié)合，親和力測定結(jié)果為2.58×10-8 M（BLI）,。

生物大分子間相互作用

• 生物大分子間相互作用（SPR/BLI）

一致性評價(jià)

• 一致性評價(jià)（SPR）

抗體篩選

• 抗體篩選（SPR）

以下Biacore實(shí)驗(yàn),，篩選針對靶標(biāo)3個(gè)細(xì)胞上清,，目的是得到可高表達(dá)、與靶標(biāo)高親和抗體的細(xì)胞株,，從以下篩選數(shù)據(jù)判斷,，127號細(xì)胞株符合要求。

SPR/BLI親和力測定服務(wù)常見問題解答

• SPR與BLI之間有哪些差異以及各自的優(yōu)點(diǎn),、缺點(diǎn)是什么,？

抗原與抗體的親和力測定在藥物的發(fā)現(xiàn)與篩選、藥效評價(jià)等階段是一項(xiàng)重要工作,。親和力是評價(jià)可逆反應(yīng)過程中兩個(gè)分子間相互作用強(qiáng)弱的特征參數(shù),，是了解分子以及識別生物學(xué)過程、藥物的發(fā)現(xiàn)與篩選等的重要指標(biāo),。
SPR和BLI技術(shù)作為表征生物分子相互作用動力學(xué)的兩種技術(shù),，一直占據(jù)主導(dǎo)地位。SPR和BLI在親和力檢測中各具優(yōu)-勢,，其均可以獲得親和力準(zhǔn)確數(shù)值以及相應(yīng)的動力學(xué)數(shù)據(jù),，SPR 具有比BLI 更長的歷史，具有更-高的靈敏度,，在分辨方面更好,；但SPR所需儀器維護(hù)較多，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的樣品不可回收,。BLI可以提供更-高的通量和更短實(shí)驗(yàn)周期,，但溫度控制范圍有限且實(shí)驗(yàn)過程中面臨樣品蒸發(fā)的挑戰(zhàn)。更多內(nèi)容詳見下表,。
如果您有興趣使用義翹神州SPR/BLI分子互作服務(wù)來支持您的研究發(fā)現(xiàn),，您可以通過以下方式進(jìn)行咨詢。

• Biacore檢測過程中,，如果為病毒樣本,，儀器需要消毒嗎？如何做清洗,？

每次檢測完病毒樣本后均需要對儀器至少進(jìn)行Desorb清洗,，除去管路中殘留的樣品，同時(shí)進(jìn)行sanitize清洗除菌,，防止管路中微生物生長阻塞管路對儀器造成損壞,。

• 親和力分析一般選擇哪種緩沖液？對蛋白緩沖液有什么要求,？

親和力分析常用的緩沖液為PBS或者HBS,；使用NTA傳感器時(shí)緩沖液中不得含有EDTA；使用AR2G /CM5傳感器時(shí)配體蛋白緩沖液中不得含有其他氨基物質(zhì),，如tris,；使用APS 傳感器時(shí)緩沖液中不得含有任何去污劑,。

• 小分子化合物可以做親和力檢測嗎？如果進(jìn)行親和力檢測,，需要用DMSO溶解嗎,？

小分子化合物可以做親和力檢測，需不需要使用DMSO溶解,，取決于小分子本身的溶解性質(zhì),。如果需要DMSO才能溶解，那么在SPR親和力分析時(shí)需要進(jìn)行溶劑校正,。

義翹神州同時(shí)擁有兩種平臺（SPR和BLI）,，可提供包括蛋白、抗體,、DNA/RNA,、脂類、多糖,、多肽,、小分子化合物、病毒,、細(xì)胞,、細(xì)菌、納米材料等多樣品類型的高通量親和力檢測,。根據(jù)客戶檢測需求,，可選擇單一平臺或兩種平臺進(jìn)行活性驗(yàn)證，助力您完成研發(fā)項(xiàng)目,。

• 穩(wěn)態(tài)分析一般親和力會相對較弱嗎,？

穩(wěn)態(tài)分析只是一種擬合方式，適用于快結(jié)合快解離的結(jié)合方式,，與親和力大小無關(guān),。無論是快結(jié)合快解離，還是慢結(jié)合慢解離,，只是不同的動力學(xué)方式,，有可能具有相同的親和力。

• 使用BLI技術(shù)測定親和力過程中出現(xiàn)非特異性結(jié)合時(shí),，要如何解決呢,？

非特異性結(jié)合是親和力檢測過程中經(jīng)常遇到的問題。使用BLI技術(shù)（Octet設(shè)備）測定親和力出現(xiàn)非特異性結(jié)合時(shí),，解決方法為：
1）除添加牛血清白蛋白（BSA）外，建議在分析物緩沖液中加入0.02% Tween-20,， 以去除疏水作用所導(dǎo)致的非特異性吸附,；
2) 將具有非特異性的物質(zhì)固化在傳感器上,；
3) 適當(dāng)降低分析物的濃度；
4) 更換傳感器,，比如從SA傳感器或者Capture類的傳感器變成APS傳感器或者 SSA 傳感器,。
5) 更換或調(diào)整緩沖液。

• 使用SPR技術(shù)測定親和力過程中出現(xiàn)非特異性結(jié)合時(shí),，要如何解決呢,？

使用SPR技術(shù)（Biacore設(shè)備）測定親和力出現(xiàn)非特異性結(jié)合時(shí)，不同情況及解決方法如下：
1） 與參比通道的非特異性結(jié)合---向分析物溶液中添加可溶性的葡聚糖,，以競爭性抑制與傳感芯片表面上葡聚糖的非特異性結(jié)合,。
2） 與配體分子的非特異性結(jié)合---該種非特異不在參比通道上產(chǎn)生響應(yīng)值，但通常表現(xiàn)為與配體通道的非飽和結(jié)合,。若混合樣品中含有如細(xì)胞裂解物或血清中的非分析物組分,，則也可能與配體結(jié)合，盡量減少這類結(jié)合的一般原則是在樣品和運(yùn)行緩沖液中使用生理水平或更-高的離子強(qiáng)度,，而且如果表面活性劑不影響親和力分析,，則應(yīng)添加表面活性劑，如果上述措施沒效果,，則應(yīng)更換其它配體,。
有時(shí)分析物會無選擇地結(jié)合到配體上（例如，許多低分子量化合物以低親和力結(jié)合到血清白蛋白上的多個(gè)位點(diǎn),，在表現(xiàn)上類似于非特異性結(jié)合）,，在該情況下，從相對低濃度的分析物樣品的傳感圖中有可能獲得關(guān)于高親和力結(jié)合位點(diǎn)的有用信息,，因?yàn)榈蜐舛葧r(shí)樣品中低親和力結(jié)合并不顯著,，調(diào)整緩沖條件有助于降低無選擇性結(jié)合的影響。

• 如何使用Biacore檢測細(xì)胞或者病毒樣本（例如潛在的大顆粒樣本）,？

以檢測細(xì)胞樣品為例：
細(xì)胞首先需要樣品前處理：①離心后棄上清,；②加入PBS重復(fù)清洗3次樣品，細(xì)胞濾網(wǎng)過濾掉聚集的細(xì)胞,，③加入醋酸鈉,，將過濾后的細(xì)胞調(diào)整稀釋至合適的細(xì)胞密度，如：4E4 cell/mL,。

• 如何使用Biacore儀器進(jìn)行表位分析,？

利用Biacore的抗原表位作圖方法進(jìn)行分析，有兩種方法,。
一種方法為配對檢測,，在芯片表面固定一種抗體，將抗原結(jié)合到抗體上；然后流經(jīng)第二種抗體時(shí),，檢測是否能夠同時(shí)結(jié)合到抗原上,；
另一種方法為基于肽段抑制檢測的抗原表位作圖，某一抗原結(jié)構(gòu)表位的肽段將直接抑制抗體與抗原上該表位的結(jié)合,。

• 如何對帶有同樣融合標(biāo)簽的兩個(gè)蛋白做親和力分析,？

可以通過氨基偶聯(lián)直接固化其中一個(gè)蛋白，另外一個(gè)蛋白作為分析物進(jìn)行檢測,。也可以使用捕獲法,，在固化完成后，使用帶有相同標(biāo)簽的無關(guān)蛋白封閉傳感器,。需要注意的是,，封閉步驟要達(dá)到飽和，而且封閉需牢固,，即封閉完成后的基線達(dá)到平穩(wěn)狀態(tài),。在滿足封閉和穩(wěn)定的情況下，就可以進(jìn)行分析物的結(jié)合和解離,。