2×PAGE專用Taq PCR預(yù)混液(含染料)-核酸提取

1. 產(chǎn)品描述：

信勵致和®2×PAGE專用Taq PCR預(yù)混液(含染料)包含Taq DNA 聚合酶,、dNTPs以及優(yōu)化的緩沖體系,，濃度為2×，使用時只需取適量 2×PAGE 專用 Taq PCR 預(yù)混液(含染料),，加入模板和引物,，并加入ddH2O 補(bǔ)足體積，使PCR Mix 溶液濃度為1×即可進(jìn)行反應(yīng),。適用于常規(guī)PCR及較短DNA片段的PCR擴(kuò)增,，專用于聚丙烯酰胺電泳檢測。

2. 產(chǎn)品特點(diǎn)：

（1）使用方便,，僅需加?模板和引物即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增,。

（2）快速、高效,，減少加樣步驟,，節(jié)約時間，可有效降低污染和加樣錯誤風(fēng)險,。

（3）組分中包含染料,，擴(kuò)增產(chǎn)物可直接用于電泳檢測

2×PAGE專用Taq PCR預(yù)混液(含染料)-核酸提取

使用說明

1. 產(chǎn)品組分：

2. 儲運(yùn)條件：

-25~-15 ℃保存12個月。干冰運(yùn)輸,。

3. 注意事項：

（1）試劑于冰上溶解,。

（2）避免試劑反復(fù)凍融。

常見問題：

1. 擴(kuò)增產(chǎn)物沒有或很少,？

原因分析：模板濃度過低,；實驗樣品DNA損傷或降解；PCR條件未優(yōu)化,；退火溫度過高；延伸時間太短,；循環(huán)次數(shù)太少,；引物設(shè)計不完善；引物濃度過低,；Mg2+濃度未優(yōu)化,；模板質(zhì)量太差。

解決方案：建議DNA樣品不要反復(fù)凍融,，以免造成DNA的損失,；優(yōu)化PCR條件,，對于基因片段較長的片段適當(dāng)增加延伸時間，增加循環(huán)數(shù),。

2. 出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增,？

原因分析：引起該現(xiàn)象的主要原因有引物濃度未優(yōu)化或者引物降解；退火溫度過低,；引物特異性低,；擴(kuò)增循環(huán)數(shù)過多。

解決方案：建議將引物置于4℃或者-20℃保存,；適當(dāng)提高退火溫度,；設(shè)計特異性高的引物；擴(kuò)增循環(huán)數(shù)不宜超過35,。

3. 陰性對照出現(xiàn)空白條帶,？

原因分析：陰性對照出現(xiàn)條帶一般有三個較為常見的原因，分別是引物特異性較低,、PCR體系存在污染,、電泳時上樣量過多導(dǎo)致陰性對照的膠孔飄進(jìn)去了樣品。

解決方案：重新設(shè)計高特異性引物,，并BLAST檢測引物特異性,；重新配置PCR反應(yīng)體系；上樣時避免過多,，手不要抖,。

4. 電泳膠圖出現(xiàn)拖尾彌散？

原因分析：配置PCR體系時DNA聚合酶加入量過多,，酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì),，酶量較多會產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象；PCR產(chǎn)物降解,。

解決方案：建議根據(jù)反應(yīng)體系的大小及產(chǎn)品說明書加入適量的酶,；建議在獲得PCR后的產(chǎn)物即可進(jìn)行電泳，置于-20℃長期儲存,，盡量不要在常溫放置,。