H322細胞,，人非小肺癌細胞

產(chǎn)品名稱：H322

細胞形態(tài)：

組織來源：

傳代情況：1:2傳代

細胞數(shù)量：1~3*10⁶細胞/25cm2培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)條件：RPMI 1640 + 2mM Glutamine + 5-10% FBS

生長條件： 95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

生長狀態(tài)：貼壁生長

存儲條件：90%FBS+10%dmso

本庫的細胞系（株）僅用于科研工作,，未經(jīng)許可不得用于其他目的。使用者不得將本庫細胞系（株）轉(zhuǎn)讓給第三者,。

H322細胞,，人非小肺癌細胞

對于貼壁細胞，若細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,，用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內(nèi)。次日觀察,，如細胞大部分又貼回瓶底,，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉,，換成新鮮的培養(yǎng)基,；如細胞還不貼壁，將細胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中,，原培養(yǎng)瓶加部分新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導,，直到問題解決,。對于懸浮細胞：收到細胞后，將細胞全部離心,，去掉舊的培養(yǎng)基,，換成新鮮的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。

特別注意：（如使用公共實驗室或者初次接觸，建議添加雙抗培養(yǎng)）

（1）貼壁細胞收到當天有少量或沒有飄忽的細胞可以當天換液,，因為路途顛簸造成大量飄忽的情況時,，請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)

（2）收到細胞后請盡快更換為含10%血清的新鮮培養(yǎng)基,，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清，（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）

（3）如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯(lián)系SUER技術(shù)人員

細胞接收后的操作流程與注意事項：

1）貼壁細胞生長緩慢,；適當提高血清濃度（最高不能超過20%），或可根據(jù)該細胞生長特性生長密度,，考慮胰酶消化后,，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)

2）如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),，請將懸浮的細胞即時離心,，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天,。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,，請及時聯(lián)系實驗室技術(shù)人員會跟進解決

3）生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長,，可將細胞進行消化,，重懸打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）

（1）吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，PBS緩沖液潤洗細胞兩次,，加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通?？刂圃?-2min）

（2）注意培養(yǎng)基PH值變化情況,，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存

（3）取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,，添加適當?shù)?培養(yǎng)基,，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

（4）鏡下觀察消化情況,，在HS505.T人淋巴結(jié)成纖維樣細胞生長特性邊緣縮小,，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰酶,，加6-8ml*培養(yǎng)基,，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散,。