Mirus Bio轉染試劑TransIT®-AAViator

腺相關病毒 (AAV) 是基因治療中廣泛使用的傳遞/遞轉機制,。近年來,，基于AAV病毒所開發(fā)的基因療法研發(fā)及臨床試驗注冊數(shù)量也呈指數(shù)級增長，也需要AAV病毒生產(chǎn)工藝及產(chǎn)能的不斷優(yōu)化及擴展,，從最早基于貼壁細胞工藝升級轉換到以懸浮為主的200-2000L反應體系,。

西美杰代理的Mirus Bio成立于1996年，在核酸遞送領域深耕多年,，于2021年8月推出GMP級別TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑,，支持AAV及LV從科研到GMP商業(yè)化生產(chǎn)。不同于傳統(tǒng)基于單組分的轉染試劑(如陽離子聚合物聚乙烯亞胺,，PEI),，Mirus Bio將多聚物及脂質(zhì)技術進行多重組合，形成多功能性的轉染方案,，克服細胞遞轉過程中的多重阻礙,，以實現(xiàn)更高效轉染和更低細胞毒性,，從而大幅度提升多種血清型AAV病毒生產(chǎn)載量,。去年7月底Mirus上市RevIT™ AAV Enhancer，已證明在不同AAV血清型別中,，可提高AAV病毒基因組滴度1.2-4.9倍,，并且在一定程度改善了實心率,。更重要的是，RevIT™ AAV Enhancer不僅可以搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑,，也適配于其他轉染試(如PEI等),，使得AAV生產(chǎn)上游成本的進一步降低成為可能，進而降低了基因治療單劑量成本,。下圖展示了國內(nèi)客戶前期測試反饋結果,，測試包括了不同血清型別的質(zhì)粒設計，適用于國內(nèi)及國外品牌的轉染試劑,、細胞及培養(yǎng)基體系,，實現(xiàn)了1.5-4倍以上的AAV病毒滴度提升。

RevIT Enhancer在國內(nèi)客戶不同AAV項目平臺上的測試反饋結果

隨著國內(nèi)外客戶項目及管線推進,，已有越來越多的客戶將TransIT-VirusGEN® 轉染試劑以及RevIT™ AAV Enhancer從搖瓶階段線性放大至200L-500L反應器,，并且已應用到處于臨床申報產(chǎn)品中,。ReciBioPharm 與Mirus Bio合作， Chris Brown(工藝流程開發(fā)部門)在線上(鏈接)展示了TransIT-VirusGEN 和RevIT™ AAV Enhancer數(shù)據(jù)結果,，并且比較了所有測試規(guī)模(搖瓶&反應器),，反饋病毒滴度放大效果非常好，并且實心率也保持相同水平,，在 50 升的生物反應器中,，也有著40%以上實心率。Chris Brown表示“選擇用TransIT-VirusGEN 和RevIT™ AAV Enhancer產(chǎn)品,，是基于我們以往的測試數(shù)據(jù),，允許最大限度地提高 AAV 產(chǎn)量。產(chǎn)量的提高,，單個50 升生物反應器可生產(chǎn)更多劑量,，從而降低單位劑量的成本。”

更多的,，Bridgebio在poster中分享了基于AAV5型別,，使用TransIT-VirusGEN® 轉染試劑以及RevIT™ AAV Enhancer從搖瓶線性放大至200L反應體系(125mL搖瓶→2L → 10L → 200L)，病毒滴度和實心率數(shù)據(jù)結果(圖1),。與原有工藝相比 (Process A：PEIPro轉染 + Expi293細胞/培養(yǎng)基),，替換成TransIT-VirusGEN® 轉染試劑后的工藝流程 (Process B：TransIT-VirusGEN® 轉染試劑 + Expi293細胞 + BalanCD培養(yǎng)基；Process C：TransIT-VirusGEN® 轉染試劑 + VP2.0細胞 + BalanCD培養(yǎng)基)均有著更高的病毒滴度(圖2)和更低的宿主DNA和質(zhì)粒DNA殘留,。

圖1. 從125mL搖瓶線性放大至200L反應體系的病毒滴度和實心率數(shù)據(jù)結果

圖2. 采用Mirus的工藝平臺均有著更高的病毒滴度

Mirus Bio 并沒有止步于此,，并于2024年10月7日重磅推出 TransIT®-AAViator AAV轉染試劑。繼續(xù)沿用Mirus Bio 多聚物及脂質(zhì)兩組分的經(jīng)典組合,，不同的是應用逆向工程思維,，基于現(xiàn)有RevIT™ AAV Enhancer，從Mirus Bio多聚物及脂質(zhì)庫中,，分別篩選出更優(yōu)化的脂質(zhì)和聚合物配方,。新推出的TransIT®-AAViator轉染體系，進一步降低了 AAV工藝生產(chǎn)流程中所需質(zhì)粒 DNA 和轉染試劑使用量,，最大限度地提高不同AAV血清型滴度和實心率,，從而提升 AAV生產(chǎn)工藝的總體生產(chǎn)效率。整合TransIT®-AAViator的AAV病毒上游生產(chǎn)工藝,，無需通過細胞密度而調(diào)整試劑和質(zhì)粒DNA加入量,，并且實現(xiàn)了單個生物反應器的生產(chǎn)劑量的成倍增加，大幅度降低了單位劑量的成本,，為基于AAV 病毒的基因治療開發(fā)提供了更優(yōu)的解決方案,。

產(chǎn)品詳情

• 產(chǎn)品名稱: TransIT®-AAViator Transfection System

• 上市日期：2024年10月7日

• 產(chǎn)品貨號: MIR 73750 / MIR 73745

• 產(chǎn)品組分：TransIT®-AAViator轉染試劑及RevIT™ AAV增強子

Mirus Bio AAV病毒生產(chǎn)相關轉染試劑產(chǎn)品參數(shù)

* HDPE材質(zhì)管/瓶

*只針對30 mL以及150 mL 規(guī)格試劑

**只針對150 mL 規(guī)格試劑

TransIT-AAViator®提升AAV生產(chǎn)效率&降低單劑量成本

生產(chǎn)劑量的成倍增加

隨著AAV病毒滴度的提升，單個反應器所允許生產(chǎn)劑量也成倍的增加,，從而大幅度降低單劑量成本,。

減少生產(chǎn)所需批次

提高AAV病毒生產(chǎn)總產(chǎn)量，減少每次生產(chǎn)的所需批次數(shù)量或擴大生物反應器規(guī)模才可滿足生產(chǎn)需求,，緩解了由于產(chǎn)能不足等諸多限制,。

減少質(zhì)粒DNA用量

TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)，降低了至少一半質(zhì)粒 DNA使用量 ,，同時仍可保持高水平的滴度和實心率,，進一步降低了批次生產(chǎn)成本。

加快工藝開發(fā)進程

TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng),，只需較少實驗優(yōu)化,，即可獲得最佳結果，從而縮短了工藝開發(fā)時間,，加快了產(chǎn)品上市速度,。

TransIT®-AAViator有著更高滴度和實心率

使用不同的質(zhì)粒設計(GFP基因-圖3；RPE65 基因-圖4),，平行比較TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)與“Poly F”(Polyplus FectoVIR® 病毒轉染試劑)以及“Poly P” (Polyplus PEIpro®病毒轉染試劑),。實驗結果顯示，在不同AAV血清型別中 (AAV5,、8,、9)，TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)有著更高的病毒滴度及實心率,，當質(zhì)粒設設計替換成治療性基因(RPE65 基因),，病毒滴度及實心率相比于競爭品牌，其優(yōu)勢更加顯著,。

圖3. 轉染GFP基因質(zhì)粒的AAV滴度

圖4. 轉染RPE65基因質(zhì)粒的AAV滴度

TransIT®-AAViator降低質(zhì)粒DNA用量

TransIT®-AAViator轉染系統(tǒng),，在較低質(zhì)粒 DNA 用量仍可得到高水平AAV病毒滴度及實心率（圖5）。

圖5. 實驗使用TransIT® -AAViator轉染試劑(試劑:DNA比例為1.25:1,vol:wt),，以 1:1:1 的質(zhì)粒質(zhì)量比轉染 pAAV-WPRE-GFP (Aldevron), pAAV-Helper (Aldevron) 和 pAAV-RepCap (AAV9 Genemedi)三質(zhì)粒,。轉染時加入RevIT AAV Enhancer（1 μl/mL），轉染后 72 小時使用化學裂解法收獲 AAV病毒,。

TransIT-AAViator實驗流程

Step 1:  轉染前,，需保證生長在培養(yǎng)基中的懸浮 HEK 293 細胞活率 > 95%。

Step 2: 轉染時：建議細胞密度為 ~ 3 × 10E6 cells/mL,，TransIT®- AAViator 試劑與DNA 加入比例為1:1 - 1.5:1,，每 1 mL 培養(yǎng)基加入RevIT AAV Enhancer 0.5 - 1.5 μl；靜止條件下孵育15-45 分鐘,，以便形成轉染復合物,，然后輕柔的加入細胞中。

Step 3: 轉染后無需更換培養(yǎng)基，一般可在轉染后 48-72 小時收獲AAV病毒,。

客戶案例分享

最新線上webinar：Enhancing AAV Production: A Novel Transfection System for Cell and Gene Therapy Applications (鏈接)

演講者信息：

Webinar內(nèi)容一覽：

通過該線上Webinar,，可了解TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)，包括了開發(fā)初衷,、數(shù)據(jù)性能對比及展示等,。來自Affinia Therapeutics 高級工藝開發(fā) Michael White， 強調(diào)了該轉染系統(tǒng)的可擴展性和工作流程的易整合性,，是想要優(yōu)化上游工藝和增加整體成本效益的理想選擇,。

此外，Michael White分享了 Affinia Therapeutics AAV轉染平臺體系納入TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)經(jīng)驗,，強調(diào)該系統(tǒng)能夠降低質(zhì)粒DNA用量,，同時也在不同規(guī)模中進行了測試(搖瓶-3L反應器)，可穩(wěn)定的保持高水平滴度,，從而大幅度提高了生產(chǎn)工藝的效率,，同時降低了AAV病毒生產(chǎn)成本。

討論重點包括：

• Affinia 比較了新一代轉染系統(tǒng)TransIT®-AAViator與當前使用的平臺工藝,；

• Affinia 在將TransIT-AAViator® 與其他試劑性能進行比較中,，如何優(yōu)化使其性能顯著優(yōu)于其他轉染試劑；

• 整合TransIT®-AAViator轉染系統(tǒng),，相比于優(yōu)化前實現(xiàn)了3 倍滴度提升及 70% 實心率,。

小結

新一代專為優(yōu)化AAV 生產(chǎn)工藝而推出的轉染試劑: TransIT®-AAViator 轉染系統(tǒng)：

• 與基于單個組分(如PEI)轉染試劑不同，可顯著的提高不同AAV 血清型別的滴度及實心率,；

• 有著更低轉染試劑及質(zhì)粒DNA使用量需求,，同時保持高水平的AAV滴度及實心率；

• 相比于競爭品牌(FectoVIR&PEIpro等),，有著更高基因組滴度及實心率,，并且質(zhì)粒設計為治療基因，其優(yōu)勢更加顯著,。

相關產(chǎn)品信息及鏈接

x西美杰代理的Mirus成立于1995年,，始終秉承著為基因遞轉提供優(yōu)化方法及高效的工具。憑借超過 25 年轉染領域的深根細作,，獲得了多項技術突破,，已成為核酸遞送領域值得信賴的品牌。Mirus科學家團隊不斷突破轉染技術的極限,，推出了VirusGEN®轉染試劑與RevIT™增強劑,，進一步提升AAV/LV產(chǎn)量，助力推動生物治療藥物的降本增效,，為CGT領域客戶賦能,。

Mirus Bio轉染試劑TransIT®-AAViator

北京西美杰科技有限公司是Mirus中國區(qū)代理,，始終秉承著專業(yè)、嚴謹?shù)膽B(tài)度為客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務,。北京西美杰是 Mirus代理,， Mirus中國代理， Mirus北京代理,， Mirus總代理,， Mirus上海代理,，,， Mirus西北代理， Mirus西南代理,， Mirus東北代理,， Mirus華北代理， Mirus華南代理,， Mirus華中代理,，負責 Mirus在中國的相關業(yè)務。