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Mem-PER真核細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒

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科學(xué)儀器

    傳統(tǒng)分離膜蛋白的方法繁瑣而耗時(shí),,并且都需要梯度分離和昂貴的超高速離心儀器。而Thermo Scientific Mem-PER真核細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒是一種快速,、簡(jiǎn)單,、便宜的膜蛋白分離方法。使用該試劑盒的三種試劑可以從培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物,、酵母細(xì)胞以及軟或硬的哺乳動(dòng)物組織中抽提并選擇性地富集膜蛋白,。
    產(chǎn)品特點(diǎn):
    • 的降低了親脂(膜)蛋白組份中參雜的親水性蛋白的交叉污染(一般< 10%)。
    • 適用于多種培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞,、酵母細(xì)胞以及哺乳動(dòng)物組織,。
    • 與SDS-PAGE、蛋白免疫印跡, 蛋白定量分析等下游應(yīng)用兼容(詳見相關(guān)產(chǎn)品),。
    • 提供簡(jiǎn)單完整的方法,,使用該方法可以在大約1小時(shí)以內(nèi)從哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織以及酵母細(xì)胞中分離膜蛋白,。
    • 僅需臺(tái)式微量離心機(jī)和離心管,。
    使用Thermo Scientific Mem-PER 真核細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒來(lái)溶解和分離酵母膜內(nèi)蛋白(釀酒酵母菌株EGY-194)向濕重大10-15mg的細(xì)胞沉淀中加入80μlMem-PER 試劑 A和100-150mg,、尺寸為405-600μm的酸洗玻璃珠并在室溫渦旋10分鐘來(lái)破裂酵母細(xì)胞的細(xì)胞壁,。短暫離心收集玻璃珠,然后將細(xì)胞裂解物轉(zhuǎn)移到新的離心管中并將離心管置于冰上,。用720 μl Mem-PER試劑B和C洗滌收集的玻璃珠然后將洗滌液加入到細(xì)胞裂解液中并在冰上孵育30分鐘,。樣本進(jìn)行4-12%Bis-Tris凝膠電泳。
    分別對(duì)從大鼠肝(圖A)和大鼠心(圖B)制備的膜蛋白進(jìn)行蛋白免疫印跡,。利用蛋白免疫印跡對(duì)通過(guò)Mem-PER 試劑制備的疏水(膜蛋白)成分和相應(yīng)的親水成分進(jìn)行分析,,分別對(duì)VDAC (31 kDa, Affinity BioRegeants),cellugyrin (29 kDa, BDTransduction Laboratories)及flotillin-1 (48 kDa, BD Transduction Laboratories)進(jìn)行免疫印跡分析。M = 膜蛋白組份,,H =親水組份,。
    對(duì)Thermo Scientific Mem-PER 試劑溶解的蛋白進(jìn)行分級(jí)。使用Mem-PER真核細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒對(duì)三種細(xì)胞系的蛋白進(jìn)行溶解和抽提,。每組疏水(膜蛋白)和親水組分均通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)操作獲得,,利用蛋白質(zhì)免疫印跡分析四種細(xì)胞定位已知的蛋白。利用SDS-PAGE/蛋白質(zhì)免疫印記分析對(duì)COX4進(jìn)行分析之前,使用SDS-PAGE樣品制備試劑盒去除膜組分中的去垢劑,。所有碎片組分中檢測(cè)到的蛋白污染量極低,。縮寫: AchE = 乙酰酯酶, COX4 =細(xì)胞色素氧化酶4亞基,hsp90 =熱休克蛋白90, M = 可溶性膜蛋白組分,,H = 親水性蛋白組分,。
    參考文獻(xiàn)
    Chattopadhyay, K., et al. (2006).J. Immunol. 177, 3920-3929
    Fujii, N., et al. (2007).Cancer Res. 67, 573-579.
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