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鬼筆環(huán)肽染色實(shí)驗(yàn)
- 公司名稱 上海達(dá)為科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2024/11/5 11:21:13
- 訪問次數(shù) 645
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鬼筆環(huán)肽染色實(shí)驗(yàn)
鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是一種從毒蘑菇Amanita phalloides中分離出來的多肽物質(zhì),,它能夠與細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白絲(F-actin)結(jié)合,,從而用于細(xì)胞骨架的染色。
鬼筆環(huán)肽與F-actin的結(jié)合是高度特異性的,,不會與肌動(dòng)蛋白單體(G-actin)結(jié)合,,因此它是研究細(xì)胞骨架的重要工具。通過使用熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽,可以在熒光
顯微鏡下觀察細(xì)胞中微絲的分布和形態(tài),。
鬼筆環(huán)肽染色實(shí)驗(yàn)步驟
1.配制鬼筆環(huán)肽溶液:通常將0.1mg的鬼筆環(huán)肽溶于1ml無水甲醇中(也可以使用DMSO或無水乙醇),,配成貯存液,并在-20°C避光條件下保存,。
工作液的濃度通常為5μg/ml,,通過將貯存液用PBS稀釋20倍來制備,。
2.細(xì)胞固定:使用3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定細(xì)胞20分鐘,,然后用PBS清洗細(xì)胞2次,。
3.染色:加入5μg/ml的熒光標(biāo)記鬼筆環(huán)肽,,室溫染色30-60分鐘,然后再次用PBS清洗細(xì)胞2次,。
4.細(xì)胞核染色:可以使用DAPI或Hoechst等染料對細(xì)胞核進(jìn)行染色,,染色時(shí)間通常為10分鐘,,之后再次用PBS清洗細(xì)胞2次。
5.封片:吸去多余水分后,,加入熒光封片液(中性或偏堿性緩沖液加等量甘油),,蓋上蓋玻片,準(zhǔn)備在熒光或共聚焦顯微鏡下觀察,。
注意事項(xiàng)
1.鬼筆環(huán)肽的分子量小,,可以輕易穿透細(xì)胞膜,因此通常不需要對細(xì)胞進(jìn)行冷丙酮和Triton X-100處理,。
2.鬼筆環(huán)肽具有毒性,,操作時(shí)應(yīng)戴手套并在通風(fēng)良好的環(huán)境中進(jìn)行。
3.鬼筆環(huán)肽染色可以與抗體染色結(jié)合使用,,以同時(shí)觀察細(xì)胞骨架和其他細(xì)胞結(jié)構(gòu),。
4.避免使用含有甲醇或丙酮的固定劑,因?yàn)檫@些固定劑會破壞肌動(dòng)蛋白的結(jié)構(gòu),,影響染色效果,。
應(yīng)用
廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究,包括細(xì)胞形態(tài)學(xué),、細(xì)胞運(yùn)動(dòng),、細(xì)胞分裂以及細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用等領(lǐng)域。
通過觀察F-actin的分布,,研究人員可以更好地理解細(xì)胞的功能和病理過程,。