化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>技術(shù)服務(wù)>細(xì)胞生物學(xué)服務(wù)>細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)>CC96314 EHA105(pSoup)感受態(tài)
CC96314 EHA105(pSoup)感受態(tài)
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海語純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) CC96314
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2024/10/31 15:37:53
- 訪問次數(shù) 137
產(chǎn)品標(biāo)簽
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
EHA105 菌株由 EHA101 菌株改造而來,,為 C58 型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利f平抗性基
因 Rif,,為了便于轉(zhuǎn)化操作,,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA105
(pTiBo542DT-DNA),此質(zhì)粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件,,
pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的 T-DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞,,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T
DNA 順利轉(zhuǎn)移)。在 EHA105 菌株中轉(zhuǎn)入 help 質(zhì)粒:pSoup 即為 EHA105 (pSoup)菌株,,可幫助
pGreen,,62SK,pGs2 系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制,,同時(shí)賦予該菌株四環(huán)素(Tet)抗性,,適用于水稻、
煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作,。本公司生產(chǎn)的 EHA105(pSoup)化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,,
pGs2(卡那m素抗性)質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率≥ 104 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
EHA105(pSoup)
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 ×100 μL
100 ×100 μL
定制
基因型:C58 (RifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine (pSoup-TetR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存; 請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存,。
質(zhì)量控制
除琥珀堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA105 和 pSoup 質(zhì)粒外,,無外源質(zhì)粒 DNA 殘留
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥104 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,,在手心融化成冰水混合物,,置于冰水浴中;
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,,用手撥管底混勻,,依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分
鐘(或干冰乙醇浴和-80℃冰凍),、37 ℃水浴 5 分鐘,、冰浴 5 分鐘;
3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基,,于 28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí),;
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板
上,,倒置放于 28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天(當(dāng)平板只含有 50 μg/ml Kan 時(shí),,28 ℃培養(yǎng) 48 h 即可;平板中同
時(shí)加入 50 μg/ml Kan,,20 μg/ml Rif 時(shí),,需 28 ℃培養(yǎng) 60 h;如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要 28℃
培養(yǎng) 72-90 h),。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用,;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10,;
3. 利f平濃度不應(yīng)高于 25 μg/μl,過高的利f平濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng),,會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率,;
4.因?yàn)?nbsp;Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略), 一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮添加相應(yīng)抗生素,。