CC96306 EHA101感受態(tài)
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 公司名稱 上海語純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 CC96306
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2024/10/31 10:42:26
- 訪問次數(shù) 112
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產(chǎn)品簡介
EHA101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利f平抗性基因Rif,，為了便于轉(zhuǎn)化操作,，
此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有 vir 基
因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件,，pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的 T
DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞,，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T-DNA 順利轉(zhuǎn)移),。pEHA101 (pTiBo542DT
DNA) 型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標簽：Kan，賦予 EHA101 菌株和卡那m素抗性,，適用于玉米,、水稻、煙
草等植物的轉(zhuǎn)基因操作,。本公司生產(chǎn)的 EHA101 化學轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,，pK7WGF2
質(zhì)粒（壯觀m素抗性）檢測轉(zhuǎn)化效率≥ 104 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
EHA101
化學感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：C58 (RifR) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (KanR) Nopaline
存儲條件
-80 ℃保存,；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存,。
質(zhì)量控制
除胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA101 外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留,；
化學法轉(zhuǎn)化效率≥ 104 cfu/μg DNA,。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物,，置于冰水浴中,；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μl 感受態(tài)細胞中，用手撥管底混勻,，依次于冰上靜置 10 分鐘,、液氮 5 分
鐘（或干冰乙醇浴和-80℃冰凍）、37℃水浴 5 分鐘,、冰浴 5 分鐘,；
3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基，于 28℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時,；
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 YEB 平板
上，倒置放于28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天（當平板只含有轉(zhuǎn)化所用雙元載體抗生素時,，28 ℃培養(yǎng)48 h即可,；
平板中同時加入雙元載體抗生素，20 μg/ml Rif 時,，需 28℃培養(yǎng) 60 h,；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif
則需要 28℃培養(yǎng) 72-90 h）。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰浴中解凍后應立即使用,；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10,；
3. 利f平濃度不應高于 25 μg/μl，利f平濃度過高不利于農(nóng)桿菌生長,，會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率,。
4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關(guān)抗性基因可以不用添加,。
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