EC96307 AGL1感受態(tài)(電轉)
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 公司名稱 上海語純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 EC96307
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2024/10/31 10:13:15
- 訪問次數 74
產品標簽
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產品簡介
AGL1 菌株為 C58, RecA 型背景,,核基因中含有篩選標簽——利f平抗性基因 Rif 和羧芐青m素抗性
基因 Carb,為了便于轉化操作,,此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型 Ti 質粒 pTiBo542DT-DNA,,
此質粒含有 vir 基因(vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件, pTiBo542DT-DNA 質粒自身的 T
DNA 轉移功能被破壞,,但可以幫助轉入的雙元載體 T-DNA 順利轉移),。AGL1 菌株適用于水稻、擬南
芥,、楊樹等植物的轉基因操作,。本公司開發(fā)的 AGL1 電轉感受態(tài)特別適用于大質粒的轉化:經
pCAMBIA2301 質粒 (size:11633bp)檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
AGL1
電轉感受態(tài)細胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型:C58 RecA (Rif R/CarbR) Ti TiBo542DT-DNA (StrepR) Succinamopine
存儲條件
-80 ℃保存; 請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存,。
質量控制
除琥珀堿型 Ti 質粒 pTiBo542DT-DNA 外,,無外源質粒 DNA 殘留,;
電轉法轉化效率≥5×105 cfu/μg pCAMBIA2301。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預冷,;或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出,,在超凈工
作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上,使乙醇充分揮發(fā),,然后插入冰中預冷,;
2. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化,加入 0.01-1μg 質粒 DNA(體積不大于 5μl),,用
200μl 槍頭將感受態(tài)-質?;旌衔锟焖俎D移到預冷的電擊杯中,蓋上杯蓋,;
3. 開啟電轉儀,,設置參數(2500 V ,200 Ω,,25μF),,將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成后快速插
入冰中,,加入 900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細胞轉移到無菌空管中,,28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。
(注:此電轉化參數為 Bio-rad 推薦,,使用者也可使用電轉儀所推薦的 Protocol 進行操作)
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,,留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻,并涂布于含相應抗生素的 YEB 平板
上,,倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天(當平板只含有 50μg/ml Kan 時,,28℃培養(yǎng) 48 h 即可;平板中同時
加入 50μg/ml Kan,,20μg/ml Rif 時,,需 28 ℃培養(yǎng) 60h;如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時,,則需要 28 ℃
培養(yǎng) 72~90 h),。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞解凍后應立即使用;
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10,;
3. 利f平濃度不應高于 25μg/μl,,過高的利f平濃度不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率,。
4. 由于 Ti 質粒丟失的概率極低(可以忽略),,所以相關抗性基因可以不用添加。