化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>技術(shù)服務(wù)>細(xì)胞生物學(xué)服務(wù)>細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)>EC96306 EHA101感受態(tài)(電轉(zhuǎn))
EC96306 EHA101感受態(tài)(電轉(zhuǎn))
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海語純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 EC96306
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2024/10/31 10:07:33
- 訪問次數(shù) 65
產(chǎn)品標(biāo)簽
聯(lián)系方式:李經(jīng)理17321241593 查看聯(lián)系方式
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產(chǎn)品簡介
EHA101
菌株為C58型背景,,核基因中含有篩選標(biāo)簽
——利f平抗性基因Rif,,為了便于轉(zhuǎn)化操作,,
此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型
Ti 質(zhì)粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA),此質(zhì)粒含有 vir 基
因 (vir 基因是
T-DNA 插入植物基因組必需的元件,,
pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的 T
DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞,,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體
T-DNA 順利轉(zhuǎn)移)。pEHA101 (pTiBo542DT
DNA)
型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽:
Kan,賦予 EHA101 菌株卡那m素抗性,,適用于玉米,、水稻、煙草
等植物的轉(zhuǎn)基因操作,。
本公司
開發(fā)的 EHA101 電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化:經(jīng) pK7WGF2
質(zhì)粒
(壯觀m素抗性,,
size:11876 bp)檢測轉(zhuǎn)化效率>105cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
EHA101
電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型:C58
(RifR ) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (KanR ) Nopaline
存儲條件
-80 ℃
保存,;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存,。
質(zhì)量控制
除胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA101 外,無外源質(zhì)粒 DNA 殘留,;
電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率
≥105cfu/μg
DNA,。
使用方法
1. 將新的
2 mm 電擊杯插入冰中預(yù)冷;或者將儲存于
75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出,,在超凈工
作臺中將其倒
置于干凈的吸水紙上,,使乙醇充分揮發(fā),
然后插入冰中預(yù)冷,;
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化,,加入
0.01-1 μg質(zhì)粒 DNA(體積不大于 5 μl),用 200
μl 槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?;旌衔锟焖俎D(zhuǎn)移到預(yù)冷的電擊杯中,,蓋上杯蓋;
3. 開啟電轉(zhuǎn)儀,,設(shè)置參數(shù)(2500 V ,,200 Ω,25 μF),,將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,,電擊完成后快速插
入冰中,加入 900 μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無菌空管中,,28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時,。
(注:此電轉(zhuǎn)化參數(shù)為 Bio-rad 推薦,使用者也可使用電轉(zhuǎn)儀所推薦的 Protocol 進(jìn)行操作)
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,,留取 100 μl 左右上清將菌體輕輕吹勻,,并涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平
板上,倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天(當(dāng)平板只含有轉(zhuǎn)化所用雙元載體抗生素時,,28℃培養(yǎng) 48 小時
即可,;平板中同時加入雙元載體抗生素,20μg/ml Rif 時,,需 28℃培養(yǎng) 60h,;如果使用的平板含有 50
μg/ml rif 則需要 28℃培養(yǎng) 72-90 小時),。
注意事項
1. 感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10,;
3. 利f平濃度不應(yīng)高于 25 μg /μl,,利f平濃度過高不利于農(nóng)桿菌生長,會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率,。
4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略),,所以相關(guān)抗性基因可以不用添加。