化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>技術(shù)服務(wù)>細(xì)胞生物學(xué)服務(wù)>細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)>EC96311 Ar A4感受態(tài)(電轉(zhuǎn))
EC96311 Ar A4感受態(tài)(電轉(zhuǎn))
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海語(yǔ)純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) EC96311
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2024/10/31 9:45:15
- 訪問(wèn)次數(shù) 59
產(chǎn)品標(biāo)簽
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,,它能夠
感染 大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物,。Ar.A4 發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型
Ri 質(zhì)粒,具有廣泛的宿主范圍(玉米,,煙草,,胡蘿卜,甘草等),,同時(shí)具有卡那m素抗性,。本公
司生產(chǎn)的 Ar.A4 化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,,pK7WGF2 質(zhì)粒(壯觀m素抗性)檢測(cè),轉(zhuǎn)
化效率>105 cfu/μg DNA,。
產(chǎn)品組成
組分
Ar.A4
電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
10 ×100 μL
100 ×100μL
定制
基因型:Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存; 請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存,。
質(zhì)量控制
無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留
電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 0.1 cm 電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘,,待其瀝干水分,,正置 5 分鐘,使
乙醇充分揮發(fā),,待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,,壓實(shí)冰面,電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋,,冰
中靜置 5 分鐘充分降溫,。
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中 5分鐘,待其融化,,加入 0.01-1 μg質(zhì)粒 DNA(體積不大于 6ul),,
用手撥管底混勻,立即插入冰中,,用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?;旌衔锟焖僖频诫姄舯校w上杯蓋,,
空管保留待用,。
3. 啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25 μF,,PC=200 ohm,,V=2400 V(此參數(shù)為 Biorad 推薦,使用者也可按
所用電轉(zhuǎn)儀推薦的 protocol 操作),,將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,,電擊完成快速插入冰中,加入 900 μl
無(wú)抗生素的 LB 并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中,,28℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí),。
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 LB 或 YEB
平板上,,倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天(當(dāng)平板只含有 50 μg/ml kan 時(shí),,28℃培養(yǎng) 48 h 即可;平板中
同時(shí)加入 50 μg/ml kan,,20 μg/ml rif 時(shí),,需 28℃培養(yǎng) 60 h;如果使用的平板含有 50 μg/ml rif 則需要 28℃
培養(yǎng) 72-90 h)。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用,;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10,;
3. 利f平濃度不應(yīng)高于 25ug/ul,過(guò)高的利f平濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng),,會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率,。
4. Ar.A4 具有卡那m素抗性,不可用于具有卡那m素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化,。