產(chǎn)品簡(jiǎn)介

XL-10-Gold 是目前轉(zhuǎn)化效率高的感受態(tài)細(xì)胞，可用于大質(zhì)?；蛘滟F連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化或構(gòu)建文庫(kù),。XL-10-

Gold 菌株為 Hte (high transformation efficiency)基因型，是可特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力

的宿主菌基因型,，已成功應(yīng)用于 40 kb 質(zhì)粒的構(gòu)建,。XL-10-Gold 幾乎缺失了所有已知的限制酶切系統(tǒng)，同時(shí)缺

失了核酸內(nèi)切酶(endA),，因此可以提高質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量,。同時(shí)，重組酶缺陷型(recA)減少了插入片段的

同源重組概率，保證了質(zhì)粒的穩(wěn)定性,。菌株帶有四環(huán)素和氯m素抗性,，并可用于藍(lán)、白斑篩選

實(shí)驗(yàn),。經(jīng) pUC19 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè),，XL-10-Gold 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA 以上。

產(chǎn)品組成

存儲(chǔ)條件

-80 ℃保存,；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存,。

質(zhì)量控制

無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA,。

使用方法

1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,，置于冰浴中融化；

2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,，輕輕彈勻,，冰上孵育 30 min；

3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,，不要晃動(dòng),，熱激 90 s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min,；

4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱）,，然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；

5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用,；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10,；

3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞,，僅用手指輕彈即可,；

4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程中除熱激外均要保持低溫,，并且要盡量輕柔