小鼠表皮細胞粘附分子(EPCAM)ELISA Kit

小鼠表皮細胞粘附分子(EPCAM)ELISA Kit

樣本處理及要求：

1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注：標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

需要而未提供的試劑和器材：

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑準備：

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟：

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。

4. 除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5. 棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6. 每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

7. 每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

注意事項：

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑,。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,，已經(jīng)變藍的底物液不能使用,。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射,。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。

9. 不能使用過期產(chǎn)品,。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。

洗板方法：

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標板朝下用力拍幾次,；將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。根據(jù)需要,，重復(fù)此過程數(shù)次,。

自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。

實驗結(jié)果計算：

以所測標準品的OD值為橫坐標,，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程,，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度。