產(chǎn)品名稱：人細胞角蛋白17(CK17)Elisa試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中指標水平,。用純化的指標抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入指標,，再與HRP標記的-O-甲基轉移酶（COMT）抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過 洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中指標濃度。

組成：

（1）結合物及標本的稀釋液,；

（2）洗滌液,，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水,；

（3）酶標記的抗原或抗體（結合物）,；

（4）酶的底物；

（5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中）,，elisa試劑盒參考標準品和控制血清（定量測定中）,；

人細胞角蛋白17(CK17)Elisa試劑盒操作步驟：

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11. 測定：以空白孔調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

操作注意事項

1.試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存,。

2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質,。

3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質前使用,。

4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。

6.洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7.底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，實驗完成后應立即讀取OD值。

8.加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。

9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。

10．試劑盒保存：,；2-8℃。

11．有效期：6個月

計算

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

訂購說明

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間好控制在5分鐘內,，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4． 請每次測定的同時做標準曲線,，好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。

雅吉生物是一家生物企業(yè)主營ATCC細胞,，細胞系,，原代細胞和培養(yǎng)試劑，重組蛋白,，ELISA試劑盒,、抗體、熒光定量PCR檢測試劑盒更多產(chǎn)品歡迎前來咨詢,。