原代細(xì)胞培養(yǎng)原理
是將機(jī)體內(nèi)的某組織取出，分散成單細(xì)胞,，在人工條件下培養(yǎng)使其生存并不斷生長,、繁殖的方法。借助這種方法可以觀察細(xì)胞的分裂繁殖,、細(xì)胞的接觸抑制,、以及細(xì)胞的衰老，死亡等生命現(xiàn)象,。

原代細(xì)胞培養(yǎng)實驗內(nèi)容：
動物的選擇：
選擇大約一半足孕時間的胚胎,，10－13天齡胚胎含有大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得,。
每組小鼠胚胎1個

實驗材料：
每組的超凈臺中有以下物品：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶,；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25% 1瓶,；PBS (-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個,；
3,、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
4,、1ml ，200μl移液器各1支,；槍頭盒2個,；無菌玻璃攪拌棒1個
5、細(xì)胞計數(shù)板1塊,；
6,、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把,；
7,、酒精燈1臺；

試驗操作步驟：
1)胚胎的分離,。適用哺乳動物(倉鼠,、小鼠和大鼠)
a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動物。
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物,。
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部,，取出含有胚胎的子宮,，置于無菌的培養(yǎng)皿上。
e．剔除胚胎周圍的包膜,，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中,。
f．漂洗胚胎，去掉PBS,。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止,。

2)將1－2個胚胎轉(zhuǎn)移至一個小的無菌培養(yǎng)皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎,， 用PBS漂洗,。
3)在無菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml 的無菌離心筒中, 加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動 ,。
4)在溫暖的環(huán)境中或置于37 °C培養(yǎng)箱中輕輕搖動15分鐘,。
5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中,，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。

6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復(fù)步驟4和5,。
7)離心混合的細(xì)胞懸液,，1200r/rain，5分鐘,，棄上清,。
8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞，按步驟7再次離心,。
9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止,。