信帆提供:IP類實驗代測服務
- 公司名稱 上海信帆生物科技有限公司
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- 更新時間 2024/10/29 12:03:45
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免疫共沉淀(Co-IP蛋白與蛋白)
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時,,完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來,。當用預先固化在agarose,beads.上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白,那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來,。再通過蛋白變性分離,,對B蛋白進行檢測,進而證明兩者間的相互作用,。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的,,符合體內(nèi)實際情況,得到的結(jié)果可信度高,。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔,。
CHIP實驗(DNA-蛋白相互作用)
染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)的原理是:在生理狀態(tài)下把細胞內(nèi)的DNA與蛋白質(zhì)交聯(lián)在一起,通過超聲或酶處理將染色質(zhì)切為小片段后,利用抗原抗體的特異性識別反應,將與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段沉淀下來,。染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)一般包括細胞固定,,染色質(zhì)斷裂,染色質(zhì)免疫沉淀,,交聯(lián)反應的逆轉(zhuǎn),,DNA 的純化,以及DNA的鑒定,。因為ChIP實驗涉及的步驟多,,結(jié)果的重復性較低,所以對ChIP實驗過程的每一步都應設計相應的對照,,而且對結(jié)果的分析也需要有一定的經(jīng)驗,。對于剛剛開始使用ChIP技術(shù)的研究人員來說,使用成熟的商品化試劑盒和相關的技術(shù)服務會達到事半功倍的效果,。
RIP實驗基本原理:
1.用抗體或表位標記物捕獲細胞核內(nèi)或細胞質(zhì)中內(nèi)源性的RNA結(jié)合蛋白,。
2.防止非特異性的RNA的結(jié)合。
3.免疫沉淀把RNA結(jié)合蛋白及其結(jié)合的RNA-起分離出來,。
4.結(jié)合的RNA序列通過mi scroarrax(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量測序(RIP-Seq)方法來鑒定,。
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