細(xì)胞名稱：小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞C166ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

1,、您收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜,，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代,。

2、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min；

3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸,，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，zui后放入37℃,，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4）待細(xì)胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果,，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代,。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中,；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜,，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存,。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4,、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）,，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁,；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min,；

3）棄上清,，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶,，于37℃,，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天,，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。

原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？細(xì)胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細(xì)胞懸液,。通常在這樣的培養(yǎng)物中細(xì)胞增殖形成匯合地單層細(xì)胞或密集地細(xì)胞懸液,。根據(jù)傳統(tǒng)定義，*次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細(xì)胞生命周期有限,，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞zui大的生長空間,，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的*性。細(xì)胞系是不斷生長,，分化的細(xì)胞群,，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能,。體外生長的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研,。實際上，連續(xù)細(xì)胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng),，隨著代數(shù)的增加細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變,。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同,。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造,。

1,、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)加倍,，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期,。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù),，傳代培養(yǎng)的目的是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長,。

2、接收到的凍存細(xì)胞該如何處理,？收到包裝箱后,，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫,。不要將細(xì)胞儲存在-80℃,，這樣會對細(xì)胞造成不可挽回的傷害。

3,、有多少經(jīng)驗才能開始正常人類細(xì)胞培養(yǎng),？推薦有經(jīng)驗者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗的話對其它細(xì)胞類型也是很有利的,。如果你是細(xì)胞培養(yǎng)的初學(xué)者或打算建立細(xì)胞培養(yǎng)實驗室,，我們會為你提供幫助。請的細(xì)胞培養(yǎng)專家,。

售后服務(wù)告知書

1）細(xì)胞出現(xiàn)問題,，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么,？

1. 細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題,，細(xì)胞丟失、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā)；

2. 細(xì)胞污染問題,，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā),；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時后,，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，（需提供真實清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片）,，重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時候并且未開封,，出現(xiàn)污染,，重發(fā)；

5. 細(xì)胞活性問題,，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，核實后予重發(fā),；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格,。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,，重發(fā),。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細(xì)胞出現(xiàn)問題,，不予以重發(fā)的情況有哪些,？

1. 客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā),；

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),；

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,，不重發(fā),；

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā),；

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),，未告知，不重發(fā),；

7. 視具體情況而定,。

YS1679P人膀胱癌組織源原代細(xì)胞

YS1680P人腦膠質(zhì)瘤組織源原代細(xì)胞

YS1681P人胰腺癌組織源原代細(xì)胞

YS1682P人卵巢癌組織源原代細(xì)胞

YS1683P人宮頸癌組織源原代細(xì)胞

YS1684P人甲狀腺癌組織源原代細(xì)胞

YS1685P人膽道癌組織源原代細(xì)胞

YS1686P人皮膚癌組織源原代細(xì)胞

YS1687P大鼠Kupffer原代細(xì)胞

YS1688P大鼠膽管上皮原代細(xì)胞

YS1689P大鼠肝卵圓原代細(xì)胞

YS1690P大鼠心肌原代細(xì)胞（新生）

YS1691P大鼠心肌原代細(xì)胞（成年）

YS1692P大鼠主動脈外膜成纖維原代細(xì)胞

YS1693P大鼠冠狀微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞

YS1694P大鼠少突膠質(zhì)原代細(xì)胞

YS1695P大鼠腦星形膠質(zhì)原代細(xì)胞

YS1696P大鼠脊髓神經(jīng)元

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YS1701P大鼠甲狀腺上皮原代細(xì)胞

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YS1703P大鼠氣道上皮原代細(xì)胞

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YS1705P大鼠肺大靜脈平滑肌原代細(xì)胞

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YS1707P大鼠腎靜脈平滑肌原代細(xì)胞

YS1708P大鼠膀胱上皮原代細(xì)胞

YS1709P大鼠胃粘膜上皮原代細(xì)胞

YS1710P大鼠小腸上皮原代細(xì)胞

YS1711P大鼠結(jié)腸上皮原代細(xì)胞

YS1712P大鼠小腸固有層成纖維原代細(xì)胞

YS1713P大鼠胎盤滋養(yǎng)層原代細(xì)胞

YS1714P大鼠骨髓內(nèi)皮祖原代細(xì)胞

YS1715P大鼠骨髓巨噬原代細(xì)胞

YS1716P大鼠骨髓樹突狀原代細(xì)胞

YS1717P大鼠骨骼肌衛(wèi)星原代細(xì)胞

YS1718P大鼠表皮角質(zhì)形成層原代細(xì)胞

YS1719P大鼠脂肪原代細(xì)胞

YS1720P大鼠角膜上皮原代細(xì)胞

YS1721P大鼠視網(wǎng)膜色素上皮原代細(xì)胞

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