預(yù)包被 96 孔微孔板

標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測試劑A

檢測試劑B

稀釋劑A

稀釋液B

TMB底物

停止解決方案

封板機(jī)

37°C培養(yǎng)箱

多道和單道移液器以及無菌移液器吸頭

噴射瓶或自動微孔板清洗機(jī)

1.5毫升管

蒸餾水

吸附濾紙

100 毫升和 1 升量筒

酶標(biāo)儀（波長：450 nm）

ELISA 搖床

1) 標(biāo)準(zhǔn)品：用推薦體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液配制標(biāo)準(zhǔn)品，制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。然后按照實驗方案中的說明,，使用標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液對標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行系列稀釋。

2) 洗滌緩沖液：按照實驗方案中的說明,，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液,。

3) 檢測試劑配制：計算所需工作液的總體積。分別用稀釋液A和稀釋液B按1:100稀釋檢測試劑A和檢測試劑B,。

1) 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、測試樣品和對照孔,。

2) 將 50 µl 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品等分到標(biāo)準(zhǔn)孔中,。

3) 將 50 µl 標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液等分到對照（零）孔中。

4) 將 50 µl 稀釋樣品等分到樣品孔中,。

5) 立即向每個孔中分裝 50 µl 檢測試劑 A,。 37°C 孵育 1 小時,。

6）洗滌3次。

7) 將 100 µl 檢測試劑 B 分裝到每個孔中,。 37°C 孵育 30 分鐘,。

8）洗滌5次。

9) 將 90 µl TMB 底物等分到每個孔中,。 37°C 孵育 10-20 分鐘,。

10) 等分 50 µl 終止液。

11) 測量 450 nm 處的 OD,。

使用前將套件組件和樣品平衡至室溫 (18 - 25 °C),。建議為每次測試?yán)L制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1. 在預(yù)涂板上分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔,、測試樣品孔和對照（零）孔,，然后記錄它們的位置。建議測量每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品至少一式兩份,。

2. 將 50 µL 每種標(biāo)準(zhǔn)品,、對照品和樣品添加到相應(yīng)的孔中。

3. 取下蓋子并倒掉液體,。

4. 立即分裝 50 µl 檢測試劑 A 工作溶液,。用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 1 小時。

5. 取下蓋子并丟棄溶液,。用 1X 清洗緩沖液清洗板 3 次,。

6. 每孔加入100 µL 檢測試劑B 工作液，密封并在37°C 下孵育30 分鐘,。

7. 棄去溶液并按照上一步驟中的說明用洗滌緩沖液洗滌板 5 次,。

8. 將 90 µl TMB 底物等分到每個孔中。用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 10-20 分鐘,。避免暴露在光線下,。孵育時間僅供參考，很佳時間應(yīng)由很終用戶確定,。不要超過 30 分鐘,。

9. 在每個孔中添加 50 µL 終止溶液。立即在 450 nm 處讀取,。