纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性,，純度高于 90%，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等

人膀胱成纖維細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，人膀胱成纖維細(xì)胞分離自膀胱組織；膀胱是一個儲尿器官,，在哺乳類動物，它是由平滑肌組成的一個囊形結(jié)構(gòu),，位于骨盆內(nèi),，其后端開口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌,，可以控制尿液的排出,。膀胱壁由三層組織組成，由內(nèi)向外為黏膜層,、肌層和外膜,。肌層由平滑肌纖維構(gòu)成，稱為逼尿肌,，逼尿肌收縮,，可使膀胱內(nèi)壓升高，壓迫尿液由尿道排出,。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌,，形成尿道內(nèi)括約肌。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口,，防止尿液自膀胱漏出,。膀胱壁分為三層：即漿膜層（蜂窩脂肪組織）、肌肉層（逼尿肌,、膀胱三角區(qū)?。┖宛つ樱O薄的一層移行上皮組織）。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的膀胱成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團(tuán),；細(xì)胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長,，平坦、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。膀胱成纖維細(xì)胞分泌的生長因子是一種具有多功能的促有絲分裂原，研究已表明其參與惡性腫瘤的形成過程。近年來,，堿性成纖維細(xì)胞生長因子在膀胱癌發(fā)病過程中的作用,、與生物學(xué)行為之間的關(guān)系以及治療上的應(yīng)用已受到重視。

1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3.用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4.待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基,。

備注：由于實驗所用試劑,、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考

客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2,，我們隨時給予解答。

1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2.在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3.傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。