人食管上皮細胞采用機械分離法結合組織貼塊法,，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，人食管上皮細胞分離自食管組織；食管是咽和胃之間的消化管,，食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短,，隨著頸部的伸長和心肺的下降，而逐漸增長,。食管可分為頸段,、胸段和腹段。脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端,，胸段位于左,、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連,，腹段很短與胃相連,。在發(fā)育過程中,，食管的上皮細胞增殖，由單層變?yōu)閺蛯?，食管使管腔變狹窄,，甚至一度閉鎖，以后管腔又重新出現(xiàn),。哺乳動物的食管結構上由內(nèi)向外分四層：黏膜層,、黏膜下層,、肌層和外膜,。其中，黏膜層,，包括上皮,、固有層和黏膜肌層。上皮為較厚的未角化的復層扁平上皮,，耐摩擦,，有保護作用。在食管與胃賁門交界處,，復層扁平上皮突然變成單層柱狀上皮,。食管被一層線性排列的、無角化,、潮濕的復層扁平上皮細胞覆蓋,，其頂端細胞膜和細胞間連接復合體聯(lián)合在一起產(chǎn)生有效滲透屏障，防止食管內(nèi)容物的滲入,。特別的是,，層屏障使表層細胞的基質(zhì)外側細胞膜和深層細胞的全部細胞膜不暴露于食管腔內(nèi)規(guī)律的大幅波動的滲透壓之下。從組織學上講,，食管上皮由兩層組成,，基底層和分化層；其中,，僅基底層的細胞可以增殖,，然后向食管腔移行。移行過程伴隨有分化的發(fā)生和分化標記的依序表達,。食管上皮細胞的培養(yǎng)是研究食管正常生理機制和食管癌變機制的非常好的體外模型,。

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

備注：由于實驗所用試劑,、操作環(huán)境及操作手法的不同,，以上方法僅供各實驗室參考

客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術問題可以技術服務電話： 按 2,，我們隨時給予解答,。

1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2.在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3.傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。