大鼠真皮成纖維細胞采用先消化,、后-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來。真皮,，位于表皮深層,，向下與皮下組織相連，真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起,，埋于基質(zhì)內(nèi),。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維,，使皮膚既有彈性，又有韌性,。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層,。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì),。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的真皮成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。真皮成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持組織的正常形態(tài),，合成和釋放細胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織,。

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃,、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

備注：由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,，以上方法僅供各實驗室參考

客戶在細胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2，我們隨時給予解答,。

1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2.在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作,。

3.傳代培養(yǎng)過程中，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。