兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞采用沖洗骨髓,、密度梯度離心,、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來，兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSC）分離自骨髓,；骨髓是機體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能制造紅細(xì)胞,、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用,，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細(xì)菌、病毒等,；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體,。因此，骨髓不但是造血器官,，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓,。出生時,，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大,，脂肪細(xì)胞增多,，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種除造血干細(xì)胞以外的,、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞，可以向骨,、軟骨,、肌組織、皮膚,、脂肪,、神經(jīng)等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞,。在骨髓中,，BMSC占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%-0.1%，含量極低,。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求較高,，在培養(yǎng)過程中,，受貼壁時間、種植密度,、血清含量,、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,，對骨髓中的造血干細(xì)胞（HSC）不僅有機械支持作用,，還能分泌多種生長因子（如IL-6，IL-11,，LIF,，M-CSF及SCF等）來支持造血。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells,，BMSCs)具有多向分化潛能,，能促進間充質(zhì)組織的再生，如：骨,、軟骨,、肌肉、韌帶,、肌腱,、脂肪及基質(zhì)等組織。在骨髓中,，BMSCs占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%~0.1%,，含量極低。而同時,，由于組織工程需要大量的種子細(xì)胞,，從嚙齒類動物骨髓分離BMSCs的技術(shù)上的難度限制了許多實驗的開展。體外分離培養(yǎng)純度高,、活力強,、生物特性均一的BMSCs對組織工程及細(xì)胞的體內(nèi)、體外實驗顯得至關(guān)重要,。

1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3.用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4.待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基,。

備注：由于實驗所用試劑,、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考

客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2,，我們隨時給予解答。

1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2.在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。

3.傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。