人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA 試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)水 平,。用純化的人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)抗體包被微孔板,，制成固相抗體， 往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長(zhǎng)因子(EGF),，再與 HRP 標(biāo)記的 表皮生長(zhǎng)因子(EGF)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng) 過(guò)che底洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,， 并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的表皮生 長(zhǎng)因子(EGF)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)濃度。

標(biāo)本要求
1．標(biāo)本處理：（1）水樣 采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次,，再經(jīng)玻璃纖維過(guò)濾后,，備查
（2）組織 樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相
關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，
可將標(biāo)本放于-20℃保存,，備查
2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA 試劑盒操作步驟
1. 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔,、空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、
待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加 50 微升,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，
然后再加待測(cè)樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡
量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。
2. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,，空白孔除外,。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復(fù) 5 次，拍干,。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
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7. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
8. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零,，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實(shí)際濃度,。

注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間最好
控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定,，計(jì)
算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

規(guī)格：
96 份/盒

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6 個(gè)月