CL020008 SiHa 人子宮頸鱗癌細胞
參考價 | ¥1350.00 |
- 公司名稱 湖南立譜沃生物科技有限公司
- 品牌其他品牌
- 型號CL020008
- 所在地長沙市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時間2023/3/27 21:53:47
- 訪問次數(shù) 1240
T25 | 1350.00元 | 10000 瓶可售 |
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SiHa 人子宮頸鱗癌細胞
(Human Cervical Squamous Cell Carcinoma)
SiHa 人子宮頸鱗癌細胞
一,、T25 細胞收到后處理
1,、觀察
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至狀態(tài)良好后灌滿完*培養(yǎng)基并密封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到細胞后,,請
先打開外包裝,,及時核對培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致,并仔細查看培養(yǎng)瓶是否有
破損或漏液等異常情況,,如有破損或漏液等異常情況,,請立即拍照,并聯(lián)系工作人員處理,。
2,、處理
(1)75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養(yǎng)瓶外部。
(2)待酒精揮發(fā)完*,,在顯微鏡下觀察細胞生長情況,,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(40x,100x,,200x,,
各三張)。前三天的細胞照片為重要的售后依據(jù),,不提供照片默認(rèn)收到時細胞狀態(tài)良好,。
(3)不要打開培養(yǎng)瓶蓋,,將細胞放入培養(yǎng)箱中靜置 2-4 小時后再做處理,以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
(4)查看細胞說明書,,按照細胞說明書中描述的培養(yǎng)參數(shù)進行常規(guī)細胞培養(yǎng)操作(見“細胞說明書”第一
頁)。 ? 貼壁細胞
? 未超過 80%匯合度時,,將培養(yǎng)瓶中的完*培養(yǎng)基收集至 50mL 離心管中(對比培養(yǎng)使用),,留大約
7mL 完*培養(yǎng)基在細胞培養(yǎng)瓶中,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。
? 超過 80%匯合度時,,將培養(yǎng)瓶中的完*培養(yǎng)基收集至 50mL 離心管中(對比培養(yǎng)使用),根據(jù)情況進
行傳代或者凍存,,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。首*傳代,建議 1:2 進行傳代(分兩個 T25),。傳代時
建議一瓶用原瓶中的完*培養(yǎng)基,,另外一瓶用自行配制的完*培養(yǎng)基,二者進行對比培養(yǎng),。
? 若細胞貼壁不牢,,在運輸過程中容易發(fā)生細胞脫落,這是正?,F(xiàn)象,。請將培養(yǎng)瓶中所有培養(yǎng)液收集至
50mL 離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,,收集上清(對比培養(yǎng)使用),,往細胞沉淀中加入胰,酶 1-2mL,,
輕輕吹打,,重懸,消化 1-2 分鐘后,,加入 5mL 完*培養(yǎng)基終止消化,。1000rpm 離心 5 分鐘,棄去上
清,,加入 1-2mL 完*培養(yǎng)基重懸細胞,。然后按 1:2 的比例進行傳代(分兩個 T25),,補充完*培養(yǎng)基
至 5-8mL/瓶,,放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 二,、凍存細胞收到后處理
1,、觀察
收到細胞后,,請檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損,、干冰已完*揮發(fā)等問題,,請立即
拍照,并聯(lián)系工作人員處理,。
2,、處理
(1)迅速將細胞取出轉(zhuǎn)移至液氮保存,建議盡早復(fù)蘇,。
(2)復(fù)蘇第一管如有細胞活性問題,,請對細胞進行不同倍數(shù)拍照(40x,100x,,200x,,各三張),并及時
聯(lián)系工作人員處理,,后續(xù)會有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管,。特別說明:未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇
第二管,出現(xiàn)問題不予售后,。
三,、細胞復(fù)蘇
(1)確認(rèn)水浴鍋已升溫至 37℃,取 5mL 預(yù)熱的完*培養(yǎng)基于 15mL 離心管中待用,。
(2)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆面具),,快速將其置入 37℃水浴中解凍,直至凍存管中
無結(jié)晶,,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁,。
(3)將凍存管中的細胞轉(zhuǎn)移至含 5mL 完*培養(yǎng)基的 15mL 離心管中,1000rpm 離心 5 分鐘,。
(4)棄盡上清,,細胞沉淀用 1-2mL 完*培養(yǎng)基重懸,接種至 T25 培養(yǎng)瓶,,補充完*培養(yǎng)基至 5-8mL/瓶,,
放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(5)貼壁 5 小時以上或次日,,更換新鮮的完*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。 四、細胞傳代
(1)細胞密度達 80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。首先,棄去培養(yǎng)上清,,用 PBS 漂洗細胞 1-2 次,。
(2)加入 1-2mL 消化液,,置于培養(yǎng)箱中消化適當(dāng)時間,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部
分變圓并脫落,,即消化完*,將細胞迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入與消化液等體積的含 10%血
清的完*培養(yǎng)基終止消化,。
(3)輕輕吹打細胞,待細胞完*脫落后轉(zhuǎn)移至 15mL 離心管,,1000rpm 離心 5 分鐘,。
(4)棄去上清液,然后按推薦比例進行分瓶傳代(收到細胞后首*進行傳代,,推薦 1:2 比例進行分瓶傳
代),,補充完*培養(yǎng)基至 5-8mL/瓶。
(5)放入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。 五,、細胞凍存
(1)細胞生長狀態(tài)良好,細胞密度達 80%-90%,,即可進行細胞凍存,。首先,棄去培養(yǎng)上清,,用 PBS 漂洗
細胞 1-2 次,。
(2)加入 1-2mL 消化液,置于培養(yǎng)箱中消化適當(dāng)時間,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部
分變圓并脫落,即消化完*,,將細胞迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入與消化液等體積的含 10%血
清的完*培養(yǎng)基終止消化。
(3)輕輕吹打細胞,,待細胞完*脫落后轉(zhuǎn)移至 15mL 離心管,,1000rpm 離心 5 分鐘。
(4)棄去上清液,,往細胞沉淀中加入 1mL/支的立譜沃無血清凍存液(貨號:PZ110R),,混勻后加入凍存
管中,并做好標(biāo)記,。
(5)將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可(如果追求更理想的細胞復(fù)蘇率,,也可選擇使用程序降溫盒),
24 小時后轉(zhuǎn)入液氮中長期儲存,,并做好儲存記錄,。