大鼠脾臟白細(xì)胞

產(chǎn)品基本信息

細(xì)胞名稱：大鼠脾臟白細(xì)胞

種屬來源：大鼠

組織來源： 脾臟

生長特性：大部分懸浮生長,，小量貼壁生長

培養(yǎng)基:： 專用培養(yǎng)基

生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：首傳代建議1：2傳代,，1:2傳代是1個T25瓶傳2個T25瓶或2個6cm皿

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL全培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜),。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

a、棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b,、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min(視細(xì)胞消化情況而定),，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完培養(yǎng)基終止消化,。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min,，棄去上清液,，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c,、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為例;

a,、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤所有細(xì)胞,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min(視細(xì)胞消化情況而定)，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完培養(yǎng)基終止消化,。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心5 min，棄去上清液,，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

培養(yǎng)注意事項

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,，干冰運輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否完揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需細(xì)胞因子等,，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,，責(zé)任由客戶自行承擔(dān),。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象,。.觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h,。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化,，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min,，棄上清,。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min,，,，用新鮮的完培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代 。

9. 注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿,。不是1個T25瓶傳2個10cm皿,。