產(chǎn)品名稱：PRECEDO乳腺癌3D類器官培養(yǎng)基（Breast Carcinoma Organoid Medium）
產(chǎn)品說明：PRECEDO乳腺癌3D類器官培養(yǎng)基（Breast Carcinoma Organoid Medium）是一款促進乳腺癌類器官體外形成和擴增的培養(yǎng)基。該產(chǎn)品為無菌的液體混合系統(tǒng),，含有維持目的細胞生長所必需的氨基酸,、維生素、有機和無機化合物和生長因子等,。該培養(yǎng)基的*配方可以提供一個合適的細胞所需營養(yǎng)環(huán)境,，選擇性地促進人乳腺癌類器官的體外生長和擴增。

產(chǎn)品優(yōu)勢：
(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴增

(3) 保持腫瘤特征

(4) 藥敏結(jié)果與臨床數(shù)據(jù)接近

使用說明：
?實驗前準(zhǔn)備
（1）提前將24孔細胞培養(yǎng)板置于37℃的培養(yǎng)箱中預(yù)熱過夜,。
（2）將15mL無菌離心管,、1.5mLEP管、移液器,、移液管,、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30 min。
（3）提前30 min從4 ℃冰箱取出乳腺癌類器官培養(yǎng)基平衡至室溫,。

（4）提前從-20℃冰箱取出所需體積的細胞外基質(zhì)膠冰上融化,。（5）配置含1%BSA的DMEM培養(yǎng)基冰上預(yù)冷備用。
?乳腺癌類器官培養(yǎng)
（1）將取自乳腺癌患者的樣本進行分離和消化,，消化后的細胞懸液進行計數(shù),。
（2）按每孔1~2×10*個細胞密度計算所需細胞數(shù)，根據(jù)計算好的體積吸取細胞懸液加入預(yù)冷的1.5mL離心管中,，離心,，棄上清，將細胞沉淀置于冰上,。
（3）按1∶2體積比,，將一份體積的含1%BSA的DMEM加入2份體積的的細胞外基質(zhì)膠（Corning#356231）中，輕輕混勻（全程冰上操作）,，然后在冰上將配好的基質(zhì)膠混合液與細胞沉淀充分混勻,。
（4）將細胞沉淀與基質(zhì)膠的混合液按照35μL/孔滴在已提前預(yù)熱好的24孔板中央，使之形成圓頂狀膠滴,。緩慢將細胞培養(yǎng)板移至培養(yǎng)箱至少30分鐘,。
（5）待基質(zhì)膠*凝固，沿24孔壁緩慢加入1mL/孔預(yù)先恢復(fù)至室溫的本類器官培養(yǎng)基,，并將培養(yǎng)板置于37℃,，5%CO2條件下靜置培養(yǎng)。
（6）鏡下觀察類器官形成情況,，每3~4天更換一次培養(yǎng)基,。
?乳腺癌類器官收集
（1）棄去培養(yǎng)基,，用基質(zhì)膠解離試劑潤洗槍頭后，每孔加入1mL該試劑,，靜置1min,。
（2）用基質(zhì)膠解離試劑潤洗槍頭后，吸取孔內(nèi)液體,，輕輕吹打圓頂狀膠滴表面，將膠滴吹散,，并將吹散后的含類器官的混合液收集至15 mL離心管中,。
（3）重復(fù)一次上述操作，將兩次洗脫下來的類器官合并收集于同一15mL離心管中,。
（4）37℃,，75rpm水平搖床上解離10min（具體解離時間根據(jù)實際情況決定，以無明顯大塊膠狀物為準(zhǔn)）,。
（5）10分鐘后在4℃下,，300g，離心5min,，小心吸棄上清,，沉淀待用。
?乳腺癌類器官傳代
（1）收集好的細胞沉淀（以無肉眼可見基質(zhì)膠狀沉淀為準(zhǔn)）加入預(yù)冷的含1%BSA的DMEM培養(yǎng)基重懸,，在4℃下,，300g，離心5min,。
（2）小心吸棄上清,，沉淀用含1%BSA的DMEM培養(yǎng)基重懸計數(shù)。
（3）按照培養(yǎng)步驟操作,，以大約1000個類器官/孔密度重新接種類器官,，繼續(xù)擴大培養(yǎng)。
注意事項：
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫,。
2.使用產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作,，避免污染。
3.本產(chǎn)品中不含血清,，含有抗生素,，如無特別需要，不用額外添加血清和其他抗生素,，可直接使用,。
4.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中,。5.請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品,，超出保質(zhì)期后,，將無法達到理想的使用效果。
6.乳腺組織樣本建議為腫瘤術(shù)中樣本,，且腫瘤細胞比例越高（至少>50%）,，培養(yǎng)成功率越高，不推薦用于少量樣本（如穿刺或循環(huán)腫瘤細胞）的培養(yǎng),。
7.本產(chǎn)品僅用于科研用途,，不能用于體外診斷。