高通量DNA合成儀

Oligo高通量DNA合成儀特點：
l 包括一個靈活的合成協(xié)議編輯器,，它允許操作員修改所包含的協(xié)議，并將它們保存在一個新名稱下,，或者從頭開始編寫協(xié)議。協(xié)議編輯可以在Excel中完成,。對于不同的合成規(guī)模和序列長度,，很容易編輯特殊協(xié)議,。比如，可以給耦合緩慢的堿基對一個特別的延長的耦合時間,。如果必要的話，可以給所有單體額外的耦合反應時間,。
l 軟件簡單易用。在計算機或平板的Excel表中

l    軟件簡單易用。在計算機或平板的Excel表中創(chuàng)建運行數(shù)據(jù)后,，可使用Wi-Fi等網(wǎng)絡連接或標準U盤傳輸?shù)絻x器上。實驗運行中,，可以從PC端收集實驗數(shù)據(jù)監(jiān)測實驗結果。  

l    性能

OligoMaker X12可以在1小時內平行合成12條20對的寡核苷酸,。

OligoMaker 48可以在2小時內平行合成多達48條20對的寡核苷酸,。

OligoMaker 96可以在3小時內平行合成多達96條20對的寡核苷酸。

OligoMaker 192可以在4小時內平行合成多達192條20對的寡核苷酸,。

l    可在IUPAC-IUB標準規(guī)則下合成10,、50,、200和1000nmol規(guī)模的核苷酸,。

兩個反應盤,，一個盤可以加載和合成核苷酸，另一個盤準備進行凈化步驟,。

OligoMaker 48可以升級為OligoMaker 96和OligoMaker 192,；

OligoMaker 96可以升級為OligoMaker 192,。

DNA的固相合成。即DNA3'端固定于基質上,，然后沿3'向5'方向依此添加核苷酸直至合成所需的DNA片段,。不同于應用DNA聚合酶的DNA合成。

合成過程
*個堿基的3‘末端固定在樹脂上,，下一個堿基的5’-OH用二對甲氧三苯甲基DMT保護,，堿基上的氨基用苯甲酸保護,，然后對3‘-OH用氨基磷酸化合物進行活化。
1。1個堿基的5’-OH和下個堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯,，
2,。然后用碘氧化成磷酸三酯
3,。加入C2H6CL2除去第二個堿基5’-OH上的保護劑DMT
循環(huán)進行加入下一個堿基
合成完畢后

亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟,。亞磷酰胺DNA合成的試劑有：保護堿基的5／—DMT,，A,、G、C,、T亞磷酰胺單體,，四唑偶聯(lián)催化劑，乙酐,，N—甲基咪唑封閉試劑,，TCA脫保護溶液,，12氧化混合物，乙腈清洗溶劑,，氨水切除溶液,。使用步驟如下：

1、仔細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,，必要時換掉試劑瓶,，特別注意乙腈的量，因為該溶劑用量較大,。

2,、將標記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。

3,、將要合成的DNA序列輸入合成儀,。

4、檢查選擇的合成步驟是否正確,。

5,、選擇結束方法：TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài)，若打算以5,，—DMT基團連接純化寡核苷酸,，將其轉變?yōu)?/span>TritylOnAuto結束狀態(tài)。

6,、選擇結束方法,，一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。

7,、在每個柱監(jiān)視器的Username下,，輸入你所希望的保存名字。

8,、以代碼代替相應的DNA序列標記每一個收集瓶,。

9、打印出每一個柱設置的詳細資料,。

10,、檢查打印出來的資料是否正確。

11,、運行StartColumn步驟檢查每一個柱的位置,，確保合成儀上合成柱處于正確的位置。

12,、檢查連接在合成儀上的溶劑殘留（廢液瓶）是否充滿,。

13、如果分部收集器用來收集每個DMT脫保護步驟的流出物，確保試管充分清潔干凈,，并打開分部收集器,，確保DMT廢液管路通向分部收集器。

14,、啟動循環(huán),，運行開始程序清洗試劑管路，除去原來的試劑,。

注意：TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT,，并將其從固相載體上切下來，儲存在收集瓶中,；TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5,，端核苷酸沒有保護基團，將其從固相載體上切下來,，儲存在收集瓶中,；TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來,，而是保留在合成柱中,；TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒有保護基團,，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來,，而是保留在合成柱中。