組織樣本中甘油含量檢測試劑盒
- 公司名稱 上海信帆生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2024/10/24 16:27:18
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
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所有產(chǎn)品僅供科研使用,,不能用于食用和醫(yī)療等
組織樣本中甘油含量檢測試劑盒
甘油測定
1. 參見下表加樣。待測樣品體積 10µl,,多加可能會抑制反應(yīng),。
2. 37oC 或 25oC 反應(yīng) 10 分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60 分鐘內(nèi)穩(wěn)定,。
3. 先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零,,然后測定各管 OD 值。
4. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算甘油濃度,。
附 Excel 作圖步驟:各標(biāo)準(zhǔn)管 OD 值為 y 軸,,標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 x 軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù),,點(diǎn)擊做圖向?qū)?,選擇-散點(diǎn)圖-,點(diǎn)擊-完成-,。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn),,點(diǎn)擊-添加趨勢線-,點(diǎn)擊-選項(xiàng)-,,點(diǎn)擊-顯示公式-和-R2 值-,。
5. 以每 mg 蛋白濃度或細(xì)胞數(shù)校正甘油含量。見說明書
說明:
1.血紅蛋白>2g/L,、膽紅素>0.25g/L,、二硫蘇糖醇、巰基乙醇,、高濃度EDTA干擾測試,。
2.紅細(xì)胞糖酵解時合成磷酸甘油影響測定。
原理:在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油,,再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化
氫,;在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺,其光密度值與甘油濃度成正比,。
適用范圍:測定實(shí)體組織,、細(xì)胞中的甘油濃度。組成 (105 次微板測定或 30 次 1 ml 比色杯測定):
(1) 裂解液 50 ml
(2) R1 試劑 16 ml
(3) R2 試劑 4 ml
(4) 4 mmol/L 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml
4 oC,,儲存 3 月,。
所需設(shè)備:酶標(biāo)儀、生化分析儀或 721、722 型可
見光分光光度計,。佳工作波長 550nm,,如無此波
長建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530,、490nm,。
一 組織細(xì)胞裂解
細(xì)胞(包括分化的脂肪細(xì)胞)裂解: 消化、離心收集細(xì)胞,?;蛑苯釉谂囵B(yǎng)皿內(nèi)裂解。通常6孔板單孔約2x106個細(xì)胞,,75cm2瓶約1x107細(xì)胞,。按比例每 1~2 x 106細(xì)胞加 0.1ml 裂解液,混勻,,靜置 10 分鐘,。
動物組織裂解:
切記要預(yù)先將新鮮組織切稱重后再進(jìn)行保存。組織凍存后再進(jìn)行解凍,、剪切,、稱重可能會產(chǎn)生嚴(yán)重的測量誤差。離心管精確稱重,,加入組織塊后再稱重,,二者相減(即減量稱重法)計算組織量(約 100mg)。強(qiáng)烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質(zhì)含量變異而產(chǎn)生的誤差,。(注意,;裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質(zhì)提取),。用電動高速勻漿器或手動玻璃勻漿器破碎組織,。(不推薦超聲方法,因其不能*和均勻破碎,。應(yīng)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整初始的組織細(xì)胞加入量),,而后,靜置 10 分鐘,。
組織樣本中甘油含量檢測試劑盒