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高效液相色譜法（HPLC）具有高壓、高效、高速,、高靈敏度,、高選擇性等特點，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥,、環(huán)保,、石化、食品,、化工等行業(yè),，是現(xiàn)在分離分析的重要方法，本文著重介紹HPLC的工作原理,、基本組成及高效液相色譜名詞術(shù)語,，使新學(xué)者快速了解高效液相色譜知識，在日常操作中理論與實踐結(jié)合,，確保HPLC的高效運行,、快速分析。

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HPLC工作原理

100多年前植物學(xué)家Tswett(茨維特) 他將植物色素的石油醚提取液倒入裝有碳酸鈣的直立玻璃管,，再加入石油醚使其自由流下,結(jié)果色素中各組份互相分離形成各種不同顏色的譜帶,，Tswett用希臘語chroma(色)和graphos(譜)描述他的

實驗方法，即現(xiàn)在的Chromatography(色譜法),。

色譜法是通過是利用混合物中各組份在不同的兩相中溶解,、分配、吸附等化學(xué)作用性能的差異,，當(dāng)兩相作相對運動時,，使各組分在兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達到相互分離，色譜法的本質(zhì)是分離分析方法

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液相色譜儀是一種用液體作為流動相的色譜分離分析的方法,，是基于金典色譜的理論,，使用高壓泵、化學(xué)柱和固定相分離柱以及高靈敏度的檢測器,，液相色譜儀和氣相色譜儀之間有什么區(qū)別呢,？這里小編就來給大家介紹一下，僅供參考,，希望對大家有所幫助,！

液相色譜儀和氣相色譜儀之間的區(qū)別是：1、分析對象之間的區(qū)別

GC:適用于氣化程度高,，熱穩(wěn)定性好,，沸點低的樣品;但對于沸點高，揮發(fā)性差,，熱穩(wěn)定性差,，離子和高聚物的樣品,，特別是對于大多數(shù)生化樣品而言，檢測不到20％的有機物質(zhì),。 HPLC：適用于溶解后可制成溶液的樣品（包括有機介質(zhì)溶液）,它不受樣品的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,它是一種分子量大,，氣化困難，熱穩(wěn)定性差的生化樣品,，聚合物和離子,。類型樣品可用于廣泛的應(yīng)用，占有機物的80％,。

2,、流動相位差異的差異GC：流動相是惰性的，氣體組分與流動相無親和力,，僅與固定相相互作用,。HPLC：流動相為液體，流動相和組分具有協(xié)同作用力,，可提高色譜柱的選擇性,，提高分離度，對分離起積極作用,。此外,，流動相有很多種，房間的選擇范圍很廣,。改變流動相的極性和pH也可以調(diào)節(jié)分離,。當(dāng)選擇具有不同比例的兩種或更多種液體作為流動相時，可以提高分離選擇性,。

3.運行條件的差異GC：變暖操作,。HPLC：室溫，高壓,。

使用液相色譜儀時應(yīng)注意什么,？更換流動相時，必須按照規(guī)定的程序進行,，否則可能會出現(xiàn)問題,，改變流動相有三種情況：互溶性的流動相的更換、無互溶性的流動相的更換和緩沖溶液的更換,，在種情況下,，使用準備更換的流動相*清潔吸濾器，然后打開儀器的排水閥并按下清洗按鈕清潔泵中的流動相,。

將吸濾器放入新的流镲中并減慢流量。清潔幾分鐘后,，關(guān)閉排水閥,。接下來清潔色譜柱和檢測器池,，直到基線穩(wěn)定。對于第二種情況,，首先使用與新舊流動相兼容的中間清潔溶液進行清潔,，然后使用新的流動相進行清潔，與種情況相同,。對于第三種情況,，應(yīng)使用蒸餾水作為中間清潔溶液，然后使用新的流動相清洗,。

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