雙熒光素酶檢測實驗（檢測分子互作）

熒光素（Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,，其中螢火蟲熒光素 F-Luciferase 和海腎熒光素 R-Luciferase *有代表性,。

研究者利用熒光素酶開發(fā)出一套極其靈敏且使用方便 的基因報告系統(tǒng)。目前,，雙熒光素酶通常是指螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素,。這兩種酶的主要區(qū)別：1. 物種來源不同；2. 它們的底物和輔因子不同,；3. 發(fā)光的顏色不同,。

螢火蟲螢光素酶是一種胞內(nèi)蛋白，從甲蟲（Photinus pyralis）中分離得到,，大小為61KDa,。在氧氣、ATP和鎂離子同時存在的條件下,，催化底物螢火蟲螢光素氧化,，生成氧化螢光素，并發(fā)出黃綠色光,，其*發(fā)光波長為560nm,。

海腎螢光素酶也是一種胞內(nèi)蛋白，從海腎（Renilla reniformis）中分離,，大小為36KDa,。只需要氧氣就可以催化腔腸素,，氧化生成高能產(chǎn)物coelenteramide，并發(fā)出藍光,，其*發(fā)光波長為465nm。

因此,，正是由于這兩種酶的底物和發(fā)光顏色不同,，所以在雙報告實驗中得到廣泛應用。

雙熒光素酶報告基因檢測優(yōu)勢

單報告基因?qū)嶒炌鶗艿礁鞣N實驗條件的影響,，而雙報告基因則通過共轉(zhuǎn)染的“對照”作為內(nèi)參為試驗提供一基準線,，從而可以避免細胞活性和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對實驗的影響，使得數(shù)據(jù)結(jié)果更為可信,。雙熒光素酶報告基因檢測常用的載體有兩種策略,。第一種是兩種熒光素分別位于兩個載體上，第二種是兩種熒光素酶位于同一個載體上,。

目前,，這一系統(tǒng)被廣泛用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點與啟動子活性分析、RNA 降解,、信號轉(zhuǎn)導,、藥物篩選、動物活體成像等領(lǐng)域,。pGL3-Basic 質(zhì)粒用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點與啟動子活性分析,；psiCHECK2 質(zhì)粒用于 miRNA 與其靶點相關(guān)分析。