Millipore Amicon Ultra超濾離心管應(yīng)用：

 • 生物樣品濃縮：包括抗原,、抗體,、酶,、核酸或微生物

 • 組織培養(yǎng)提取物或細(xì)胞裂解液中大分子組分的純化

 • 對稀釋或從柱洗脫液預(yù)先純化的蛋白質(zhì)進行濃縮

 • 脫鹽和緩沖液更換

Millipore Amicon Ultra超濾離心管訂購信息：

改進了垂直膜的設(shè)計,，Amicon Ultra-0.5系列性能更好,，離心時間更短

Amicon Ultra-4系列,，用于濃縮物體積 1–4mL 的合適裝置

Amicon Ultra-4 超濾管超濾管使用離心管和蓋裝配,。

Amicon Ultra-15系列，用于濃縮物體積 <15 mL

Amicon Ultra-15 超濾管超濾管使用離心管和蓋裝配

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號 的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積,、濃縮目標(biāo)體積而定,?？芍貜?fù)使用,，使用一次就扔掉太浪費,。

1,、選擇合適的超濾管,，主要考慮MWCO和濃縮體積，最常見的是Ultra-15（10kD）,。到底選擇多大截留分子量比較合適呢？10kDa,、 5kDa、還是30kDa,？通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa,，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾 管。若目的蛋白分子量為10kD左右,，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說明書,，注意超濾膜對各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同,，表格中有,。

2、新買來的超濾是干燥的,，使用前加入MilliQ水，水量*過膜,，冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘,。然后將水倒出，即可加入蛋白液,，加入的多少,，以不超過管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕,，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預(yù)冷,。

3,、平衡。質(zhì)量和重心二者都要達到平衡,。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜,。開始離心超濾（離心機預(yù)冷至4度）。不同離心機的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后,，有所不同,。具體可參閱附件里的說明書,。離心機的加速度調(diào)至比較低檔，減小對膜的壓力,。注意，一定要等離心機達到目的轉(zhuǎn)速之后,，方可離開 離心機,，否則離心機出問題時,，無法第一時間處理，后果不可預(yù)測,！膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整（角轉(zhuǎn)離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中,，一般轉(zhuǎn)速 開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命,。

4、當(dāng)濃縮到剩下1ml時,，【取50ul國產(chǎn)Bradford溶液，加入10ul流穿,，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白,。如果管漏了，將 上層和流穿重新倒入新管中開始超濾,。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min,，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】,，繼續(xù)加入 剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱）,，直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,，導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀,，要確定沉淀的具體原 因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適,；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決,，后者的方法是換不同的Buffer,，直到蛋白不發(fā)生沉淀為 止。

5,、前面幾步用以濃縮蛋白,，如果要換Buffer,，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經(jīng)0.22um超濾膜超濾）,，再 濃縮至1ml左右，連續(xù)三次,，最后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定，一般不多于500ul,，也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍 左右的體積濃縮算,，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的,。

6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭,，輕輕吹打、混勻蛋白液,，注意不要碰到超濾膜，然后吸取 濃縮液,，每次吸接近200ul，直到吸完,。管底剩下的最后一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜,。最后加入MilliQ水到超濾管中，沒過 超濾膜,，防止膜失水變干,。

7,、以下是處理超濾管,，重復(fù)利用超濾管的步驟,。

8、倒出超濾管里的水,，用milliQ水輕輕潤洗幾次,，【若管底有可見的蛋白沉淀,，可以先加入水,，然后用槍頭吹打,，注意不要碰到膜，吹打至沉淀懸 起,，然后倒掉，不可用自來水猛沖】然后加入0.2M的NaOH溶液,，室溫放置20min，期間平衡超濾管,。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,，將 管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,，不斷稀釋NaOH濃度,。50ml管和蓋子用自來水洗，內(nèi)壁再用 MilliQ水洗干凈,。

9、取出浸沒的管芯,，加至接近滿的MilliQ水,，50ml管也加滿MilliQ水,，將管芯慢慢放入50ml離心管，排出部分水,，然后蓋上蓋子，放4度保存,，直到下次使用,。一般來說,，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞,。

問：超濾管能重復(fù)使用嗎,？

答：可以,。一般也就用個一兩次就換新的，網(wǎng)絡(luò)顯示可用2-5次,。

用離心管濃縮一種蛋白，可以考慮使用,，先用緩沖液洗滌,，再用去離子水反復(fù)洗滌,。殘留蛋白雜質(zhì)多時，可以0.1N NaOH 清洗以及0.1% SDS清洗，去除和溶解蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)的,。然后將超濾離心管的超濾膜泡在疊*鈉溶液或20%的乙醇溶液中,，防止長菌，而且防干,，只要超濾膜侵了水,，就不可以再讓它干,，否則超濾膜的分子結(jié)構(gòu)就變了,。

不可以用超聲洗滌,！

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥,、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途,。請勿存放于普通住宅區(qū)。

2. 為了您的安全和健康,，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

超濾管化學(xué)兼容性



密理博產(chǎn)品規(guī)格及價目表