番紅-固綠染色（軟骨）在涉及關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨的形態(tài)學研究中，常需要聯(lián)合使用多種染料以顯示其組織學結(jié)構(gòu),。其中,，起源于上世紀60年代的番紅O-固綠染色因可以直觀反映關(guān)節(jié)軟骨、軟骨下骨和骨組織的結(jié)構(gòu)而備受青睞,。

軟骨組織由軟骨細胞和軟骨基質(zhì)組成,，軟骨組織及其周圍的軟骨膜構(gòu)成軟骨。軟骨根據(jù)基質(zhì)內(nèi)所含纖維素成分不同分為透明軟骨,、彈性軟骨,、纖維軟骨。軟骨染色方法有很多種,，例如甲苯胺藍法,、阿利新藍法、番紅O法等,。番紅O-固綠軟骨染色法的染色原理在于嗜堿性的軟骨與堿性染料番紅O結(jié)合呈現(xiàn)紅色,，嗜酸性的骨和酸性染料固綠結(jié)合而呈綠色或藍色，與呈現(xiàn)紅色的軟骨對比鮮明,，從而將軟骨組織與骨組織區(qū)分開,。通過圖像分析軟件可對番紅O染色的軟骨基質(zhì)進行定量分析。

番紅-固綠染色步驟：
（1）骨組織固定,、脫鈣,，制成石蠟切片；

（2）切片常規(guī)脫蠟至水,；

（3）入新鮮配制的Weigert染液染色,；

（4）流水沖洗；

（5）酸性乙醇分化液分化,；

（6）蒸餾水洗,；

（7）在固綠染色液內(nèi)浸染,；

（8）蒸餾水洗；

（9）入番紅O染液內(nèi)浸染,；

（10）蒸餾水洗,；

（11）用乙酸溶液洗滌切片，以便去除殘留的固綠,，再用蒸餾水洗,；

（12）分別用95%乙醇，無水乙醇脫水,；

（13）二甲苯透明,，中性樹脂封固；

（14）鏡檢,。

染色結(jié)果：軟骨基質(zhì)深紅色,，軟骨細胞核藍色，細胞漿,、肌肉,、膠原纖維及骨組織呈灰綠色。