油紅O屬于偶氮染料，是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑,，與甘油三酯結(jié)合呈小脂滴狀,。脂溶性染料能溶于組織和細(xì)胞中的脂類，它在脂類中的溶解度比在溶劑中大,。當(dāng)組織切片置入染液時(shí),，染料則離開染液而溶于組織內(nèi)的脂質(zhì)(如脂滴)中，使組織內(nèi)的脂滴呈橘紅色,。

染色結(jié)果：細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,，組織內(nèi)脂滴被染成橘紅色。

1樣本保存
1.1取材及冷凍

切取組織時(shí)應(yīng)使用鋒利的刀,、剪,，切取組織塊時(shí)，從刀的根部開始向后拉動(dòng)切開組織,。組織塊的厚度約為0.2~0.3cm,，大小為1.5cm×1.5cm x 0.3cm為宜。將要切取的平面朝下放到塑料包埋盒底部,，在液氮表面停留約30秒把組織凍硬,，注意停留太久易使組織凍裂。立即把凍硬的組織塊裝入自封袋中保存于-80℃低溫冰箱,。

1.2切片 

切片前將組織樣本置于-20℃冰箱內(nèi)復(fù)溫30 min,，切片厚度在5～7 μm，太厚貼片不牢固,，更不利于鏡下觀察,。包埋可用OCT,也可用膠水代替。用高粘度膠水在支撐架上滴加形成一個(gè)小臺(tái),，將組織放上,，在組織周圍用膠水包埋一下放在冷臺(tái)上冷凍。包埋使組織上,、下方有一定的邊,，有利于連續(xù)切片，而且展片時(shí)可以避免組織皺縮。待組織達(dá)適當(dāng)硬度即可切片,，切片時(shí)組織的冷凍程度是切片的關(guān)鍵環(huán)節(jié),，凍得過硬，切片呈碎屑狀,；凍得不夠,，切片呈粥糜狀或切不成片。

1.3貼片和固定
載玻片必須預(yù)先處理,，常用多聚賴氨酸包被,。需要注意多聚賴氨酸不可反復(fù)使用，且不能用玻璃容器存放,。將切片小心貼附于載玻片上,，貼片時(shí)手要穩(wěn)，并且手要有一個(gè)向下伸展的動(dòng)作,，立即將切片放入固定液中,。以往的經(jīng)驗(yàn)用吹風(fēng)機(jī)吹干再固定，但*干后的組織容易在沖洗時(shí)脫片,，并且組織細(xì)胞發(fā)生退行性變,；另外，可溶性抗原不能晾干,，應(yīng)立即固定,。固定液的選擇因抗原而異，但一般抗原可用4℃預(yù)冷的丙酮固定15 min,，此固定劑比較溫和,，對(duì)抗原保存較好。
2  油紅O染色步驟

1.1．切片用4%甲醛固定10分鐘,；

2.2．蒸餾水洗,；

2.3．60％異丙醇浸洗；

2.4．油紅O染液10分鐘(染液可回收再利用),；

2.5．60％異丙醇分色至背景無色,；

2.6．蒸餾水洗；

2.7．Mayer蘇木精復(fù)染,；

2.8. 自來水洗(藍(lán)化)1～3分鐘,；

2.9．蒸餾水洗；

2.10．甘油明膠封片,。

3 圖像采集

通過顯微鏡拍照,，采集分析樣本相關(guān)部位。