細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶,，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA,。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder,?；蚪MDNA斷裂時(shí)，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標(biāo)記的dUTP (fluorescein-dUTP) ,，從而可以通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè),，這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理。

Tunel染色

（1） 脫蠟：65℃,、30min,；二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ,；

（2）水化：將脫蠟后的切片經(jīng)100%酒精,、95%酒精,、85%酒精、75%酒精,、雙蒸水各3min ,；

（3）消化：將玻片浸入胰蛋白酶內(nèi)消化40分鐘，PBS洗3min×3次,。

（4）制備TUNEL反應(yīng)混合液,。

（5）加50μl TUNEL反應(yīng)混合液于標(biāo)本上，加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應(yīng)37℃反應(yīng)1h,；PBS洗3min×3次,。

（6）加50ul POD于標(biāo)本上，加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應(yīng)37℃×30min,，PBS洗3min×3次,。

（7）DAB染色3-10min，自來(lái)水沖洗,，蘇木素復(fù)染,， 1%鹽酸酒精分化，顯微鏡下觀察,，控制染色程度,。

（8）脫水：75%酒精、85%酒精,、95%酒精,、100%酒精，逐級(jí)脫水,、各3min.

（9）透明：二甲苯透明3min×2次,。

（10）中性樹(shù)膠封片。

注：

以上是石蠟包埋樣本的處理方式