Corning 35-010-CV Fetal Bovine Serum, USDA approved南美胎牛血清，USDA認(rèn)可血源地

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康寧公司是在生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品方面擁有超過95年歷史的quanqiu 的研發(fā),、制造和供應(yīng)商?？祵帉?duì)于細(xì)胞培養(yǎng)及生物制藥,、藥物研發(fā)及生物光子學(xué)、分子生物學(xué)及基因組學(xué),、微生物學(xué)及質(zhì)量檢測,，以及化學(xué)領(lǐng)域的效率提高、成本降低,、時(shí)間節(jié)約等方面有著突出貢獻(xiàn),，成為眾多科研人員jikekao的實(shí)驗(yàn)室伙伴。

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BD Discovery Labware業(yè)務(wù)收購?fù)瓿珊?，康寧將其旗下Falcon^?,、BioCoat^TM、Matrigel^? 和 Gentest^TM  等品牌納入康寧品牌大家族：Corning^?,、Axygen^?,、Gosselin^TM和PYREX^?。我們可信賴的zhuoyue品牌協(xié)同專業(yè)技術(shù),，幫助研究者全面優(yōu)化項(xiàng)目方案和實(shí)驗(yàn)流程,。

康寧的技術(shù)發(fā)展將改變研究者的工作方式，諸如用于免標(biāo)記檢測的Corning? Epic? 技術(shù)及服務(wù),、一系列用于細(xì)胞培養(yǎng)和檢測的優(yōu)化合成表面,、生物表面、用于更有效大規(guī)模細(xì)胞擴(kuò)增及下游應(yīng)用的單品及封閉系統(tǒng)解決方案,、自動(dòng)化方案,、用于簡化樣品制備及基因庫建設(shè)的二代測序方案，這些方案將為科學(xué)家開啟全新的高效時(shí)代，成就突破性的發(fā)現(xiàn),。

Corning  南美胎牛血清,，USDA認(rèn)可血源地

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Corning 35-010-CV Fetal Bovine Serum, USDA approved南美胎牛血清,，USDA認(rèn)可血源地,，產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品品牌：Corning

產(chǎn)品名稱：Fetal Bovine Serum, USDA approved南美胎牛血清，USDA認(rèn)可血源地

產(chǎn)品貨號(hào)：35-010-CV

產(chǎn)品規(guī)格：500mL/瓶

Corning 35-010-CV Fetal Bovine Serum, USDA approved南美胎牛血清,，USDA認(rèn)可血源地,，產(chǎn)品說明：

• FBS是一種常用的細(xì)胞培養(yǎng)基補(bǔ)充劑，有助于維持細(xì)胞生長和滿足代謝要求,。
• 血清在cGMP設(shè)施中進(jìn)行無菌收集和處理
• 每批生血清在用于生產(chǎn)前都要進(jìn)行內(nèi)毒素,、殘余血紅蛋白濃度和微生物質(zhì)量的篩選在過濾前，將幾批原血清混合在一起并連續(xù)混合,，以確保整個(gè)批次的質(zhì)量一致后一批要檢測內(nèi)毒素,、血紅蛋白、pH值,、支原體和促生長劑,。生化檢測和病毒檢測也可根據(jù)要求提供
• 常規(guī)的FBS來源于美國農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的國家（例如：墨西哥、洪都拉斯,、哥斯達(dá)黎加,、尼加拉瓜等）的畜群
• 熱滅活胎牛血清（FBS）在56℃下加熱30分鐘

Corning 35-010-CV Fetal Bovine Serum, USDA approved南美胎牛血清，訂購產(chǎn)品*貨號(hào)：

Corning 35-010-CV Fetal Bovine Serum, USDA approved南美胎牛血清,，USDA認(rèn)可血源地,，產(chǎn)品使用方法：

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，經(jīng)常加入5%-20%的胎牛血清，jichang使用的康寧胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜,，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中使用10%的Corning澳洲 胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞，效果非常好,。但是有些細(xì)胞也會(huì)使用5%的康寧胎牛血清南美或者20%的康寧胎牛血清,，要根據(jù)具體 細(xì)胞選擇合適的康寧胎牛血清濃度。

Corning 35-010-CV Fetal Bovine Serum, USDA approved南美胎牛血清,，USDA認(rèn)可血源地,，產(chǎn)品保存方法：

1、需要長期保存的康寧胎牛血清必須儲(chǔ)存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中,。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月,。切勿將血清在 37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血 清中的有效成分會(huì) 被破壞，而影響血清質(zhì)量,。如果一次無法用完一瓶,可 將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中,。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留 一 定體積空間, 否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂,。

2,、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接 過濾血清,。

3,、瓶裝Corning胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程 中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,減少沈淀的發(fā)生,。.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而 出現(xiàn)沉淀,。

4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉 淀物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體 參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞 發(fā)生化學(xué)趨化和活化,。

5,、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身 的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下 "小黑點(diǎn)":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物 的形成會(huì)顯著增多,。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染,。一般情況下,此小黑 點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生 長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清。

Corning南美胎牛血清,，常見問題解答：

一,、Corning血清滅活問題。

1,、問：加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎,？

答：不是必須的，看做什么實(shí)驗(yàn)了,。

2,、問：康寧胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎,？

答：如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞，血清一般是不需要滅活的,，這樣可以有效保存血清中的生長因子,。 但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞,，血清是 需要滅活,，一般是56℃，30min,。

3,、問：我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)，胎牛血清要滅活嗎,？

答：進(jìn)口的一般都已滅活,，國產(chǎn)的不一定，jiaohao還是滅活一下再用較安全,。

4,、問：我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞，培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎,？因?yàn)檠逯锌赡苡行┭a(bǔ)體和抗體,，是不是會(huì)影 響轉(zhuǎn)染？我想未滅活的血清中含些抗體補(bǔ)體可能會(huì)和病毒相結(jié)合,，影響 轉(zhuǎn)染,，正確嗎？細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞,， 病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清,。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí)，目的是什么,？

答：血清一定要滅活,，可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí)以后再加血清。避免雜蛋白對(duì)病毒和宿主 結(jié)合過程的干擾,，一般是2-6小時(shí),，根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定。血清不一定需 要滅活,，滅活的目的是將血清中的補(bǔ)體滅活 ,！這要根據(jù)實(shí)際情況而定，如果沒有把握那就滅活吧,，也不麻煩56度半個(gè)小時(shí),。

5、問：(1)我買的是康寧胎牛血清,，要滅活嗎,？有些說法是需要,，有些說直接解凍后就可以加入到培 養(yǎng)基中；我配制胰蛋白酶液,，用的是D-PBS，有關(guān)系嗎,？

答：關(guān)于Corning胎牛血清的熱滅活,，是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室將血清的熱滅活還是作為 常規(guī)來執(zhí)行,，因?yàn)橛袃蓚€(gè)作用,，一是滅活補(bǔ)體，第二是滅活血清中可 能存在的支原體,。但是實(shí)驗(yàn)者并沒有考慮熱處 理對(duì)血清中的生長因子,、氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響。

我在實(shí)驗(yàn)室處理血清的時(shí)候,，有一次水浴箱在滅活過程中出現(xiàn)故障,，溫度升高到80℃，血清變成了凝膠狀 ,，我重新處理了另外一份血清,，將兩份血清對(duì)比，發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到 血清所含的抗體蛋白,。在56℃下滅活半小時(shí)以 上,，肯定也會(huì)對(duì)里面的蛋白起到破壞作用。下次有機(jī)會(huì)我做個(gè)延長滅活時(shí)間的實(shí)驗(yàn)試試,，看看到底有多大的影響,。熱 滅活之后，血清放在四 度冰箱久了,，就會(huì)有沉淀產(chǎn)生,，這常常會(huì)被認(rèn)為是微生物污染或者是黑膠蟲污染。為了驗(yàn)證到 底有沒有污染,，常常又會(huì)把血清放置37℃溫育,，但是血清中的蛋白會(huì)進(jìn)一步析出，后還是 要做鏡檢,，無菌培養(yǎng)試驗(yàn) ,，和革蘭氏染色試驗(yàn)，非常麻煩,。

我看過一份資料,，里面提到70%的實(shí)驗(yàn)者認(rèn)為滅活是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,， 而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等,。其中jichangyong的手法是56℃熱處理30 分鐘,。隨著血清采集、處理,、加工工藝的提高 ,，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對(duì)血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效 性和必要性,。有人比較 過11個(gè)不同細(xì)胞株,，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對(duì)6 個(gè)細(xì)胞株(HBAE，MDBK,，Vero,，成纖維細(xì)胞，MRC-5) 的生長帶來負(fù)面影響,，三個(gè)細(xì)胞株(FOX-NY,，MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響，而只有兩個(gè) 細(xì)胞株(Balb/3T3,， Sp2/0Ag14 hybrid),，在熱滅活之后，細(xì)胞生長有輕微的改善,。所以,，在正常的操作下，熱滅活通常對(duì)細(xì)胞的生長沒 有明顯的促進(jìn)作用,。

你可以摸索一下,，血清從-20℃冰箱拿出來之后在常溫解凍，然后混勻分裝成兩份,，一份滅活,，一份不滅活 ，比較這兩種血清對(duì)細(xì)胞是否有影響,。然后再確定是滅活還是不滅活,。 這個(gè)過程多也就一個(gè)星期。同時(shí)你還要考慮 血清滅活與否對(duì)你后續(xù)的實(shí)驗(yàn)有沒有影響,。

問：(2)分裝后的血清從-20℃取出放4℃讓其液化,，卻見血清比較混濁，有沉淀產(chǎn)生,，這屬正常嗎,？

答：正常。

二,、Corning胎牛血清的保存問題,。

1、問：2016年6月到期的康寧胎牛血清到2017年5月還能用嗎,？

答：只有試試了,，如果一直在-20℃凍著來者,，應(yīng)該還可以，先少用點(diǎn)看看,。養(yǎng)細(xì)胞系應(yīng)該沒問題,，原代不 行。

2,、問：請(qǐng)問我自然溶化好的胎牛血清和1640培養(yǎng)基今天用不上,，明天用，我不想放到冰箱里,，放在室溫下 一晚行嗎？100毫升培養(yǎng)瓶加多少培養(yǎng)基呢,？

答：可以放4℃,。4-5ml。

3,、問：4℃冰箱內(nèi)保存3個(gè)月的胎牛血清,，能否繼續(xù)使用？相關(guān)細(xì)胞和其它試劑的代價(jià)比較高,，不敢輕易嘗 試,。

答：需要長期保存的康寧胎牛血清必須要保存在-20至-70℃的低溫冰箱中，4℃冰箱中保存時(shí)間不要超過1 個(gè)月,。

三,、血清滅活時(shí)溫度問題。

1,、問：因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室水浴鍋失控,，血清滅活時(shí)，溫度到了61.7℃,，這血清還能用嗎,？

答：多長時(shí)間啊,？短時(shí)間應(yīng)該可以吧,，我有一次加熱了一個(gè)多小時(shí)，還照樣用,。

2,、問：我滅活胎牛血清時(shí)，用的電磁爐,，定在了70℃,，本來說調(diào)溫度到56℃再放血清的，后來忘了,，就把 血清放進(jìn)去了,，所以滅活的溫度肯定超過56℃了,，不知道這樣對(duì)血清 有沒有影響？

答：常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,，而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等,，其中jichangyong的手法是56℃ 熱處理30分鐘?？纯茨沭B(yǎng)的細(xì)胞是什么,，一般的話估計(jì)問題不大，要是 很珍貴的細(xì)胞還是慎重一點(diǎn)啊,。熱滅活目的是 為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì),， 在對(duì)補(bǔ)體滅活以外，熱處理同時(shí)也對(duì)血清中可能存在的支原體具有滅活作 用?，F(xiàn)在好像不主張熱 滅活,，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面影響，對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生,，此外 ,，有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用。

四,、Corning牛血清可否代替人AB型血清,？

問：我現(xiàn)在在做人的外周血b淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)，文獻(xiàn)上要求用人的AB型血清,，但是我覺得很多代理商都沒有 ,。我想FBS代替，但不知道可否,，我先是擔(dān)心免疫排斥之類,，但是我查 了些資料后，應(yīng)該不會(huì)(我覺得),。但是我又不 能夠TRY,。因?yàn)榧?xì)胞因子確實(shí)太貴了，所以咨詢一下,。謝謝,！

答：an照文獻(xiàn)的做。除非你系列實(shí)驗(yàn)證明你用代用品的結(jié)果與文獻(xiàn)的相同(你還是要用到文獻(xiàn)的試劑) ,。細(xì)胞培養(yǎng)的影響因素很多,，特別是培養(yǎng)基的成分。

五,、Corning胎牛血清的制備方法問題,。

1、問：我的實(shí)驗(yàn)需要自己制備一些血清用于培養(yǎng)細(xì)胞，有沒有人知道用于培養(yǎng)細(xì)胞的血清需要怎樣的制備 過程,？

答：自己制備血清當(dāng)心污染啊,。如果無菌條件好的話，用靜置析出方法就行,。

2,、問：一般我們用得胎牛血清用前還要滅活，我想用大鼠的血,，不知道要不要滅活,？

答：你直接把采來的血液在離心管里4℃過夜，離心,，取上清,，在無菌過濾，也可滅活,，然后分裝凍存,，用 時(shí)再配。

3,、問：如果滅活會(huì)不會(huì)對(duì)血清中的一些因子有損傷,？

答：加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺,， 激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在進(jìn)行免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細(xì)胞,、昆蟲細(xì)胞 和平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清。滅活 一般不會(huì)對(duì)血清中的一些因子損傷的,。

六,、心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)血清的使用問題。

1,、問：在進(jìn)行心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí),，需要用含血清的培養(yǎng)基中止胰酶的消化作用，我現(xiàn)在使用的是含血清 10%的培養(yǎng)液,，但近日看北醫(yī)一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的課件發(fā)現(xiàn),，有用1%血清培 養(yǎng)液進(jìn)行中止消化的，想問一下,，1%的是否可 以,，效果是否有保證？這樣確實(shí)能節(jié)省不少血清的。

答：關(guān)于心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)的FBS問題：

(1)1%的血清*培養(yǎng)基可不可以,，得看你胰酶的用量,。但是在心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)就不行。 10%的FBS* 培養(yǎng)基效果都不太好,，開始心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)需要高濃度的FBS,，20%左 右，但這就有出現(xiàn)另一個(gè)問題,，在FBS*培 養(yǎng)基中,，成纖維細(xì)胞呈優(yōu)勢細(xì)胞，須得在培養(yǎng)基加入適量的BrdU以抑制其生長,，純化心肌細(xì)胞,。

(2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白質(zhì)如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用 ,。

(3)元代心肌細(xì)胞培養(yǎng)的FBS使用,，有講究：剛開始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無血清的 DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng),。

2,、問：我胰酶的用量是0.08% ，并混和了0.08%的膠原酶,。FBS要高濃度遞減是否是說的在細(xì)胞培養(yǎng)中啊,， 難道在消化時(shí)終止也需要如此高的濃度嗎，還有,，我的BRDU只用到48 小時(shí)就不用了,，因?yàn)閾?dān)心其損傷太大，可以持續(xù) 用多久呢,？

答：我用10%FBS終止的,，然后差速1h，然后還是用10%FBS的HG-dmem養(yǎng)的,，沒有用brdu,，心肌細(xì)胞還是比 較多和穩(wěn)定的，我第3天就可以用,，第2天晚上看就會(huì)有搏動(dòng),。

七、血清和培養(yǎng)基的種類及品牌問題,。

1,、問：細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清用哪個(gè)公司的產(chǎn)品比較好呢？周圍有人用Corning胎牛血清或Hyclone的,，這兩種跟Gibco或Sigma胎牛血清出品的差別大嗎,？

答：如果是長得非常快得細(xì)胞如pa317，293,，c6等惡性腫瘤細(xì)胞,，一般得國產(chǎn)血清就可以，如果是原代培養(yǎng)的細(xì)胞,，應(yīng)用胎牛血清或類標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,，Hyclone公司血清的 質(zhì)量不如GIBCO(同類血清)。國產(chǎn)的杭州四季 青和甘肅民海（中美和資）不錯(cuò),。有些細(xì)胞(如：sf9,，293還有其他一些元代細(xì)胞)，用Gibco的比其他兩種好很多,， 會(huì)大大加速試驗(yàn)進(jìn)度,。 對(duì)于其他一些細(xì)胞(如：vero，MDCK,，pk)四季青,，Hyclone的小牛血清足矣！另外,，Gibco的 還要看產(chǎn)地,。

2、問：近要訂一瓶康寧胎牛血清,，實(shí)驗(yàn)室之前都在用小牛血清,，沒有買過胎牛血清。請(qǐng)問哪個(gè)公司的好一些 ,？問過試劑公司,，有兩種：一種是PAA的(分普通級(jí)和優(yōu)級(jí)),，一種是 Hyclone的(只有普通級(jí),，而且是新西蘭產(chǎn)的)。 試劑公司推薦使用PAA優(yōu)級(jí)的,，但看好多文獻(xiàn)都用Hyclone的,，公司說是因?yàn)楝F(xiàn)在Hyclone的都不是美國進(jìn)口的了。請(qǐng) 問用的哪種胎牛血清 比較好,？

答：民海的效果還不錯(cuò),，要是不放心國產(chǎn)的，那就買進(jìn)口的,。進(jìn)口的好多公司都有,，新西蘭產(chǎn)的效果一般 ?？祵幪ヅＱ暹€可以,。民海的似乎比四季青的要好 些。復(fù)蒙的感覺也 不錯(cuò)。

3,、問：四季青“無噬菌體,、低內(nèi)毒素胎牛血清”與“無支原體胎牛血清”的區(qū)別 ？培養(yǎng)腫瘤傳代細(xì)胞用哪一個(gè)比較好些,？

答：用無支原體胎牛血清就可以啦,。

4、問：SKBR-3細(xì)胞培養(yǎng)用哪種型號(hào)的1640培養(yǎng)基及胎牛血清,？

答：我一直用GIBCO的1640,，你可以買含HEPES的1*10L的包裝，胎牛血清也是用的GIBCO,，10%就行,。

八、牛血清污染噬菌體的問題,。

1,、問：有誰知道小牛血清制造過程中怎樣能夠避免噬菌體的污染，以及對(duì)已污染噬菌體的牛血清怎樣能夠 除去噬菌體,？ 

2,、問：我也想知道，我用的血清中大部分都有噬菌體,，它對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)到底有什么影響,？

暫無回答。

九,、培養(yǎng)基血清濃度問題,。

問：在1640里加血清時(shí)加多了，90ml里加了20ml血清,，約為18%,，以前都是加10ml的，查了網(wǎng)上多建議用 10%-15%,，有關(guān)系嗎,？

答：我認(rèn)為一般來說血清濃度的較大波動(dòng)對(duì)細(xì)胞的狀態(tài)影響較大，建議再加90ml1640調(diào)成10%,。血清濃度大 當(dāng)然細(xì)胞狀態(tài)感覺要好,，但是高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá) 譜，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,。10%的濃度培養(yǎng)鼻煙 癌細(xì)胞很好,。

十、問：MTT加藥的時(shí)候加不加血清,？加藥時(shí)要用無血清的培養(yǎng)基嗎,？

答：我的藥就是用含Corning血清的培養(yǎng)基稀釋的,，不含血清的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞有毒性或抑制作用，無形中對(duì)細(xì)胞造 了一個(gè)serum-free的模型,，細(xì)胞在提內(nèi)本來就是有血清供應(yīng),，如果該藥 物都不能對(duì)抗，那該藥物就沒有什么臨床價(jià) 值了,，這是我的理解,。

十一、PC12細(xì)胞培養(yǎng)所用血清問題,。

問：我正準(zhǔn)備購買上海細(xì)胞所的未分化的PC12細(xì)胞,，需要滅活的馬血清，可現(xiàn)在買血清很困難,，好像是海 關(guān)有封鎖,，代理商這么說的，我原定購買的Gibco的horse surum,，現(xiàn)在 無法買到了,，好容易找到一個(gè)目前可以進(jìn)血 清的公司Hyclone，有一種Donor Equine serum是馬血清嗎,？

答：Hyclone的Donor Equine serum可以用,，我以前用的就是這個(gè)。我當(dāng)時(shí)是在鼎國(重慶辦事處)買的,， 100ml大概140元,，具體不記得了。當(dāng)時(shí)是看它比別的進(jìn)口的馬血清便宜 ,。另外：我買了以后滅活的,。

十二、AB血清的制備問題,。

問：本人想從人的外周血中分離AB血清的,，用于B淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)。謝謝大家給點(diǎn)建議,。人的血,，來之不易 啊,。

答：是AB血型人的血清嗎,？這種血清即沒有抗A型抗原抗體，也沒有抗B型抗原抗體,。分離血清時(shí)將采集的 血液注入試管中,，待血液凝固后離心分離血清?？蓪⒉杉难悍旁?7 ℃水浴箱中促進(jìn)血液凝固,，減少凝固時(shí)間,。離 心可在2500～3000rpm，10min,，足可以分離血清,。分離后將血清吸出保存即可。分離血清的量可按采集血液的50%左 右計(jì)算,，因?yàn)榧t細(xì)胞占 總血液的50%左右,。當(dāng)然整個(gè)過程要注意無菌操作。

十三,、Corning胎牛血清內(nèi)是否含糖,？

問：我想做糖誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的試驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)液里加入了20%的胎牛血清,。因此胎牛血清里是否含有糖對(duì)我 實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)液糖終濃度影響比較大,。今天打電話問GIBCO公司的技術(shù)顧 問，回答我糖濃度少于5μg/ml,，因此基本 可認(rèn)為是不含糖,。但我今天把胎牛血清送到我們醫(yī)院檢液科，結(jié)果卻是：6.2mmmol/l(葡萄糖氧化酶法),。難道是檢 測人血清的血糖濃度的方 法不能用于檢查牛血清嗎,？(另起茶水驗(yàn)?zāi)蚴录?檢驗(yàn)科沒有給我回答。

答：應(yīng)該是不含糖的,。

十四,、康寧血清或培養(yǎng)基產(chǎn)生了顏色或沉淀的問題：

1、問：我用的是康寧牛血清,，56℃30分鐘滅活后出現(xiàn)了白色少量絮狀沉淀,，是不是污染？還能不能 再用,？血清的生產(chǎn)日期是2006年7月(現(xiàn)在是2007年6月11日),。

答：應(yīng)該問題不大。你可以取少量血清放入培養(yǎng)皿中,，37℃過夜培養(yǎng)看看就知道是否污染了,。血清中沉淀 物的出現(xiàn)有許多種原因，但jipubian的原因是由于血清中脂蛋白的變性所 造成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在 血渭解凍后,，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,，并不影響血清本身的質(zhì)量。 若您欲去除這些絮狀沉 淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心,，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起 過濾。

2,、問：我用MTT法測細(xì)胞的增殖,，用DMSO裂解細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)把DMSO加入到孔中就會(huì)形成乳白色(用的含胎牛血 清的1640培養(yǎng)基,，由于沒有離板子的離心機(jī),，所以沒有去除培養(yǎng)基直 接加的DMSO)。以前用含小牛血清的培養(yǎng)基沒有 看到有這種情況,。該怎么解決,？

答：為什么要用離心機(jī)離心呢？難倒你養(yǎng)的是懸浮細(xì)胞嗎,？如果是貼壁細(xì)胞的話直接將MTT倒掉,，再加DMSO 即可，我們就是這么做的,，效果很好,！并且測細(xì)胞的增殖的話如果不 去掉MTT就加DMSO的話誤差應(yīng)該很大！有時(shí)不一 定就是血清的原因,，可能跟你的MTT放置的時(shí)間或以及其他成分有關(guān),！

3、問：(1)康寧胎牛血清500ml,，今天解凍后沒有混勻直接分裝,，結(jié)果使得前面的幾管是清亮的，后面就 帶有棕色的,，不知有沒有影響,？估計(jì)有什么影響？前面 的成分好還是棕 色的成分好??？

答：肯定有。jianyi還是重新混合重新分裝,，我覺得有效成分會(huì)集中在棕顏色部分,。

問：(2)為什么會(huì)出現(xiàn)棕色呢？ 

答：康寧胎牛血清中的棕色多一些可能是因?yàn)榧t蛋白的含量高些的緣故吧,。

問：(3)血清滅活之后可以存放嗎,？我的是前天滅活的，但是沒有加到培養(yǎng)基里,，而是放在冰箱里,，那下次 可以直接用嗎？還是再次滅活??？

答：當(dāng)然可以，如果多的話,，分裝后jianyi放在－20℃,，下次用時(shí)再解凍，也不用再滅活,。jianyi用一管拿一 管,，少許血清可以放在4℃。分裝時(shí)還要注意不要裝得太滿,，以免溢出污 染,。

十五、污染和過濾的問題,。

1,、問：懷疑Corning胎牛血清染菌，想用濾膜過濾一下,，可否自己用0.22μm濾膜過濾,？對(duì)血清性質(zhì)有多大影響？有 做過的么,？

答：可以過濾的,，血清當(dāng)出廠時(shí)都是0.22μm或0.1μm過濾除菌。想證明有沒有染菌不用過濾這么麻煩 ,，只要放置于37℃過夜就可以了,，如果有微生物污染會(huì)變渾濁的，如 果還是澄清的就說明沒有問題的,。實(shí)驗(yàn)室中血清 很難直接過濾,，一般要加到培養(yǎng)基中再過濾。我們實(shí)驗(yàn)室制備培養(yǎng)基時(shí),，都使用濾膜過濾,，一般而言如果制備1-2瓶 培養(yǎng)基，一個(gè)濾膜及 一支30ml注射器可以過濾50ml小牛血清,。如果大量制備培養(yǎng)基也可以將血清加到培養(yǎng)基中,，使 用0.22微米的大濾膜一起過濾。

2,、問：我懷疑我用的*1640培養(yǎng)液被污染了,，準(zhǔn)備重新過濾消毒，過濾后是否需要補(bǔ)充胎牛血清,？如需 又如何補(bǔ)充,？

答：*1640培養(yǎng)液被污染了，如果是支原體的話,，過濾沒有作用,，支原體可以通過濾膜,。我們用1640液 ，都是配液后保留500ml,，然后其他的分裝100-200ml,，現(xiàn)用現(xiàn)配因?yàn)檠?清比1640要貴，如果你想過濾的話,，建議你 加原比例血清,，因?yàn)檠宀粫?huì)很容易通過濾膜。主要的還是找到可能污染的原因,。

3,、問：加好了Corning牛血清雙抗的培養(yǎng)基由于污染了再過濾后還能用嗎？

答：建議不要用了,。在加了雙抗的情況下已經(jīng)污染,，那么細(xì)菌污染的可能性會(huì)較小了。一般的過濾除不能 去除病毒或者部分真菌的污染的,。

4,、問：我準(zhǔn)備把使用的*1640培養(yǎng)液重新過濾一遍，不知道培養(yǎng)液中的血清成分是否能通過濾膜,，過濾 后是否還需要補(bǔ)充胎牛血清,？如需又如何補(bǔ)充？

答：可以透過,，但是隨著液體量的增多會(huì)很慢,，如果不加壓會(huì)比較麻煩，還有jianyi用低蛋白吸附的,，不然 損失是比較大的,。

十六、問：懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)能否加Corning胎牛血清,？如果加了會(huì)有什么結(jié)果,？為什么懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)就不能加血清？

答：血清是細(xì)胞培養(yǎng)基中重要的培養(yǎng)成份之一,，對(duì)細(xì)胞生長有廣泛影響,。在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，我們通常會(huì)加入 10%的血清,。血清的質(zhì)量對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的成功至關(guān)重要,。一般說來，牛血清 包括以下成分：生長因子(如***,，白細(xì)胞介 素等),，他們可以促進(jìn)細(xì)胞生長；貼附因子，他們可以促進(jìn)細(xì)胞的貼壁,，往往只有細(xì)胞貼壁才能增值(懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞 除外),；蛋白質(zhì)(如血清 白蛋白，球蛋白等),，既可以作為營養(yǎng)物質(zhì),，又可以中止胰酶的作用,；還有很多成分不明的物 質(zhì),。血清還可以起到解毒作用，如脂肪酸,、重金屬和某些蛋白酶的毒性,。血清還可以是細(xì)胞免 受機(jī)械損傷。因此,，無 論是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞,，血清是*的。除非因?qū)嶒?yàn)要求無血清培養(yǎng)時(shí),，例如：為使細(xì)胞同步化時(shí),，我們會(huì) 采用無血清培養(yǎng)的。單純的說懸浮細(xì)胞培養(yǎng)不 能加血清就沒有太多的道理了,。

十七,、關(guān)于中和消化液需要的血清量。

問：用胰蛋白酶消化細(xì)胞后,，需要用Corning胎牛血清中和,。具體這種中和作用所要求的胰蛋白酶和血清之間的比例是 多少？

答：做了很久的試驗(yàn),，真的沒有想過胰酶和血清的對(duì)應(yīng)關(guān)系,。不過細(xì)想下來，這個(gè)應(yīng)該也沒有固定的比值 ,。血清的品種都是不同的,，成分必然有差異，如何能確定其與胰酶的比 值關(guān)系,？我們消化細(xì)胞的時(shí)候,，如果是傳代， 細(xì)胞變形后,，吸出胰酶直接加入適量的hanks液或者全培,，這個(gè)量看自己的喜好和吹打細(xì)胞方便而定。一般都可以中 止消化的,。不會(huì)存在繼 續(xù)消化的事情,。如果是從組織上消化細(xì)胞做原代培養(yǎng)，我一般都使用全培進(jìn)行中止，而且加的 很多,，0.25%的胰酶,，用10%血清，按1:2的比例應(yīng)該是足夠的,。當(dāng)然全培是2,，一般我養(yǎng)細(xì)胞 的時(shí)候，會(huì)用國產(chǎn)的比 較便宜的血清配制全培,，專門用于中止消化,，這樣有幾個(gè)好處：一是中止消化的效果應(yīng)該好于hanks液吧，再是也有 利于維持細(xì)胞活性,。而且這部分液體會(huì)被離心 去掉,，血清便宜，離心掉了不會(huì)心疼,。而養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候用好血清,。個(gè)人 觀點(diǎn)，僅供參考,。

十八,、血清中的懸浮物問題。

1,、問：發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的細(xì)胞瓶中背景有許多的小黑點(diǎn),，培養(yǎng)液中也有一些漂浮的物?？戳酥暗奶詾槭悄z原 蟲,。本打算換液，換液前特意看了下前些天配的培養(yǎng)液,，肉眼發(fā)現(xiàn)培養(yǎng) 液中有懸浮的顆粒狀物質(zhì)(不多),，于是放在鏡 下觀察，新鮮培養(yǎng)液中有一些懸浮的小顆粒,，不多,。(培養(yǎng)液是R1640+20%牛血清+1%雙抗)于是又將分裝在4℃保存的 小牛血清拿出觀察，肉 眼可見5,、6個(gè)白色小小球狀的物質(zhì),，在血清瓶稍靠下的部位懸浮。鏡下觀察,，也有少量的不知 什么物質(zhì)的東西漂浮,。小牛血清是Hyclone新西蘭的，標(biāo)簽上寫已經(jīng)經(jīng)過2μm濾膜過濾處 理,。根據(jù)上述培養(yǎng)液的情 況,，是否說明培養(yǎng)液已被污染,？如果是正常的血清是不是在鏡下不應(yīng)該看到雜物，哪怕是極少量的,？根據(jù)上述血清的 描述,，是不是說明血清也存在問題，還能用 嗎,？補(bǔ)充：細(xì)胞培養(yǎng)以來生長狀態(tài)就不好,。買血清的時(shí)候廠家說明不用滅 活，所以未滅活,。

答：(1)Corning胎牛血清應(yīng)該-20℃保存,，解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),，若血清解凍時(shí)改變 的溫度太大實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。

(2)康寧胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,，但jipubian的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白 在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中,，亦可造 成沉淀物,。

(3)若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清,，再放回冷凍,，若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月,，儲(chǔ)存 在2－8℃時(shí),，血清中的各種蛋白和脂蛋白，可能聚集而形成沉淀或可見 的混濁,。

(4)解凍血清時(shí),，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生,。

(5)排出了血清的原因，在考慮實(shí)驗(yàn)用品和無菌操作的問題,。