小鼠腎臟HE染色實驗服務

小鼠腎臟HE染色實驗服務

一,、實驗前準備

主要試劑與儀器

• ?固定液?：4%多聚甲醛或10%中性福爾馬林

• ?染色液?：Harris蘇木素、0.5%伊紅Y

• ?梯度酒精?：70%-100%乙醇系列

• ?設備?：石蠟切片機,、光學顯微鏡

二,、實驗操作流程

1. 取材與固定

• 沿腎門縱切腎臟為兩半

• 4%多聚甲醛固定24-30小時

• 流水沖洗1小時去除固定液

2. 脫水與透明

• 梯度脫水：

• 30%→50%酒精各2小時

• 75%酒精過夜

• 80%→100%乙醇各2小時

• 透明處理：

• 50%乙醇+50%二甲苯20分鐘

• 純二甲苯Ⅰ/Ⅱ各20分鐘

3. 浸蠟與包埋

• 石蠟浸漬：

• 蠟Ⅰ30分鐘

• 蠟Ⅱ40分鐘

• 蠟Ⅲ1小時

• 石蠟包埋定型

4. 切片制備

• 切片厚度4-5μm

• 60℃烘片至蠟融化

• 多聚賴氨酸(PLL)包被載玻片防脫片

5. HE染色步驟

1. ?脫蠟復水?：

• 二甲苯Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ各15分鐘

• 100%→70%乙醇梯度(每級5分鐘)

• 蒸餾水沖洗

2. ?核染色?：

• 蘇木素染色15秒-6分鐘(根據(jù)染色液濃度調(diào)整)

• 流水沖洗10分鐘

• 1%鹽酸乙醇分化1-4秒

• 溫水反藍10分鐘

3. ?胞質(zhì)染色?：

• 伊紅染色3-25秒

• 快速涮洗去除多余染料

4. ?脫水封片?：

• 梯度酒精脫水

• 二甲苯透明

• 中性樹膠封固

三、結果判讀與問題排查

正常染色特征

• ?腎小球?：藍紫色細胞核,，粉紅色基質(zhì)

• ?腎小管?：清晰的上皮細胞邊界

• ?間質(zhì)?：染色均勻無沉淀

常見問題與解決

1. ?染色過深?：

• 蘇木素：增加鹽酸乙醇分化時間

• 伊紅：70%乙醇脫色

2. ?染色不均?：

• 檢查脫水是否干凈

• 確保染色液新鮮無沉淀

3. ?組織脫落?：

• 加強載玻片包被處理

• 縮短烤片時間

四,、應用實例

在IgA腎病模型中，HE染色可顯示：

• 系膜細胞增生

• 腎小球系膜區(qū)增寬

• 基底膜增厚