T0P10感受態(tài)細(xì)胞*
產(chǎn)品貨名：*0 Chemically Competent Cell
產(chǎn)品貨號(hào)：G6015-20(20支100ul),、G6015-100(100支100ul)
規(guī)格/簡(jiǎn)介：G6015-20(20支100ul),、G6015-100(100支100ul)

基因型

F- mcrA△(mrr-hsdRMS- -mcrBC) φ80 lacZ △M15△lacX74 recAl ara△139△(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

簡(jiǎn)要說(shuō)明：

T0P10菌株來(lái)源于MC1061菌株，是目前實(shí)驗(yàn)室用的感受態(tài)細(xì)胞之一,，基因型與DH10B高度類(lèi)似(DH10B為galE15型,， 而T0P10為galU型)。CLBio *0生長(zhǎng)速度快(比DH5a快,，但比Mach1-T1生長(zhǎng)速度慢),，10小時(shí)可見(jiàn)克隆，recA1和 endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取,?？捎糜跇?gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選等實(shí)驗(yàn),，具有鏈霉素抗性,。CLBio系列T0P10感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108cfu/ μg,。

操作說(shuō)明：

1. CLBio *0感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中)，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)并用手打EP管底輕輕混勻,，冰上靜置25分鐘,。

2.42°C水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率,。

3.向離心管中加入700 μ 1不含抗生素的2YT或LB無(wú)菌培養(yǎng)基,，混勻后37°C，200 rpm復(fù)蘇60分鐘,。

4.5000rpm離心一分鐘收菌,，留取100μ 1左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37°C培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng),。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,，將平板放37°C培養(yǎng)至少13h.

注意事項(xiàng)：

1. CLBio感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化,，融化后8分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒,，否則會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。

2.混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作,。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量,。

T0P10感受態(tài)細(xì)胞*