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產(chǎn)品名稱：豬心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞

組織來(lái)源：心臟

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含FBS,、EGF、bFGF,、IGF,、VEGF、Heparin,、Hydrocortisone,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

豬心臟微血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

豬心臟微血管內(nèi)皮分離自心臟組織；心臟是脊椎動(dòng)物身體中重要的一個(gè)器官,，主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力,，把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟由心肌構(gòu)成,，左心房,、左心室、右心房,、右心室四個(gè)腔組成,。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開(kāi)，故互不相通,，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣）,，這些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流,。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng),，向器官、組織提供充足的血流量,，以供應(yīng)氧和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無(wú)機(jī)鹽,、尿素和尿酸等）,，使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞是組成心臟微血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞,，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對(duì)維持血管張力,、調(diào)節(jié)血壓,、抗血栓形成等有重要作用,，在心臟血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。近年來(lái)大量研究表明,，心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能和病理改變直接影響心肌細(xì)胞功能,，也是諸多毒素、炎癥因子及病毒等重要靶位,，其作為體外研究的細(xì)胞模型在心肌缺血-再灌注發(fā)病機(jī)制和細(xì)胞間旁分泌細(xì)胞生長(zhǎng)因子研究中起著重要作用,。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的豬心臟微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的豬心臟微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

二,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a）,、對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）、對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。

收到細(xì)胞如何處理,？

1、首先,，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,。若有,，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）,。

2,、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問(wèn)題,，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋,，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3,、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細(xì)胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。

4、靜置完成后,，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照,，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）,；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),。

5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%,，可正常傳代,；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。

6,、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸,。鏡檢時(shí),，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml,；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作

公司正在出售的產(chǎn)品：

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