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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO,，貨號21875-091),，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,，液氮儲存,。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,，1000RPM,，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
磷酸丙糖異構(gòu)酶1檢測試劑盒  英文名稱:Norcaesalpinin E  純度：≥98%

白細胞分化抗原CD109檢測試劑盒  英文名稱:Tinospinoside C  純度：≥98%

免疫球蛋白重鏈可變區(qū)檢測試劑盒  英文名稱:7-O-Acetylbonducellpin C  純度：≥98%

Igκ鏈V-I區(qū)HK102檢測試劑盒  英文名稱:Bonducellpin D  純度：≥98%

凝膠溶素檢測試劑盒  英文名稱:12-Acetoxyabietic acid  純度：≥98%

α黑色素細胞刺激素檢測試劑盒  英文名稱:Teuvincenone H  純度：98%

受體相互作用蛋白檢測試劑盒  英文名稱:Triptonodiol  純度：≥99%

CXC趨化因子受體7檢測試劑盒  英文名稱:ent-7α,9-Dihydroxy-15-oxokaur-16-en-19,6β-olide  純度：≥98%

CXC趨化因子受體4檢測試劑盒  英文名稱:ent-11α-Hydroxy-15-oxokaur-16-en-19-oic acid  純度：≥98%

14-3-3蛋白beta檢測試劑盒  英文名稱:14-Deoxy-ε-caesalpin  純度：≥98%

14-3-3蛋白gamma檢測試劑盒  英文名稱:Caesalmin B  純度：≥98%

14-3-3epsilon檢測試劑盒  英文名稱:Caesalmin E  純度：98%

14-3-3theta檢測試劑盒  英文名稱:Triptobenzene H  純度：≥98%

14-3-3zeta檢測試劑盒  英文名稱:Paniculoside III  純度：≥95%

轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2檢測試劑盒  英文名稱:2-Acetoxy-3-deacetoxycaesaldekarin E  純度：≥98%

Titin檢測試劑盒  英文名稱:Methyl 7β,15-dihydroxydehydroabietate  純度：≥98%
LBA4404 感受態(tài)細胞ANGPT3/ANG3/ANGPT4/ANG4  血管生成素3/血管生成素4一抗    * 0.1ml Mefenacet

RFTN2  RFTN2蛋白一抗    * 0.2ml Metsulfuronmethyl solution

RGAG4  RGAG4蛋白一抗    * 0.2ml Metalaxyl

caspase9 p10  半胱蛋白酶蛋白9p10一抗    * 0.2ml Metoxuron

S100A10  S100鈣結(jié)合蛋白A10一抗    * 0.2ml Monuron

UNC93B  內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白UNC93B一抗    * 0.2ml Nicosulfuron

hnRNP M/CEAR  異質(zhì)性核糖核蛋白M一抗    * 0.2ml nAmyl mercaptan

OSTM1  骨硬化病相關(guān)跨膜蛋白1一抗    * 0.2ml AmberliteIR120
操作方法：
1. 感受態(tài)細胞從-80℃拿出,，迅速插入冰中,，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率,。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘,。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌,，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng),。如果進行藍白斑篩選操作,，將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h。
基本共性:
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構(gòu)成的生物膜,，即細胞膜,。
2、所有的細胞都含有兩種核酸：即DNA與RNA,。
3,、作為遺傳信息復制與轉(zhuǎn)錄的載體。
4,、作為蛋白質(zhì)合成的機器—核糖體,，毫無例外地存在于一切細胞內(nèi)，核糖體,，是蛋白質(zhì)合成的機器,，在細胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5,、所有細胞的增殖都以一分為二的方式進行分裂,。
6、能進行自我增殖和遺傳
7,、新陳代謝
8,、細胞都具有運動性，包括細胞自身的運動和細胞內(nèi)部的物質(zhì)運動
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,，根據(jù)要求可始終保持細胞活力,，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,，包括活細胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu)、生命活動等,。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,，同時,，可以施加化學、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,，需要時,，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
產(chǎn)品僅用于科研采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術(shù),、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學,、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設(shè)備。