雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名：雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Infectious Bronchitis Virus (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒,、96T×2/盒、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 雞傳染性支氣管炎是由傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus,，IBV）引起雞的一種急性,、高度接觸傳染性呼吸道傳染病，本病呈世界性分布,，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疫病之一,。疫苗免疫是預(yù)防和控制雞傳染性支氣管炎發(fā)生的有效途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實際的疫苗免疫效果,，直接關(guān)系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力,。

    雞傳染性支氣管炎抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫)適用于：雞血清抗體的檢測，以確定被檢雞是否感染過雞傳染性支氣管炎病毒或免疫雞體內(nèi)抗體水平,；評估雞群感染IBV的風(fēng)險程度,；了解雛雞母源抗體水平,，為IBV免疫程序的制定提供參考。

【原    理】

    雞傳染性支氣管炎抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫)由預(yù)包被雞傳染性支氣管炎病毒重組N蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒抗體。實驗時,，在酶標(biāo)板中加入對照血清和稀釋的待檢血清,，經(jīng)溫育后，若樣品中含有雞傳染性支氣管炎病毒的抗體,，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)記物,，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液,，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性支氣管炎病毒抗體,。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 2～8℃保存,，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存,，避免受潮,。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm,、630nm波長的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器,。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮，無溶血,、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存,。

2.用樣品稀釋液將待檢血清先按10倍稀釋（如在稀釋板中加入90μl樣品稀釋液再加10μl血清,，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋,。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫,。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔,、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存,。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰,、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入樣品稀釋液90μl,，再加入稀釋后的血清10μl,。

注：樣本稀釋比例相當(dāng)于1:100。

4.混勻,，蓋好蓋板膜,，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體,，每孔加350 ul工作洗滌液,，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次,，后一次拍干,。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。蓋好蓋板膜,，置37℃避光反應(yīng)30分鐘,。

7.洗滌，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl，混勻,，蓋好蓋板膜,，置37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl,，混勻,，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值），無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】 實驗正常的情況下,，陰性對照≤0.10,，陽性對照≥0.6。

【檢驗結(jié)果的解釋】

1.C.O（臨界值）=0.13+陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.07時以0.07計算）,。

2.未曾免疫雞群：樣品A值≥C.O為陽性,；樣品A值＜C.O為陰性。

3.免疫雞群：監(jiān)測并記錄樣本當(dāng)時的抗體水平,，根據(jù)結(jié)果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動向,。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒IgG抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強,、中,、弱的粗略評估。

【注意事項】

1.實驗操作時需戴手套,、穿工作衣,，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗,。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶,，使用時需恢復(fù)至室溫以*溶解,。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈,。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮,。

7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號試劑組分不得混用,。