多肽合成、修飾與偶聯(lián)
- 公司名稱 安諾倫(北京)生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地 江蘇無錫
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時(shí)間 2020/5/14 14:18:44
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多肽合成
采用逐步縮合定向法以得到具有特定氨基酸順序的多肽,,把不需要反應(yīng)的氨基羧基用基團(tuán)保護(hù)起來,,再進(jìn)行連接反應(yīng),保證定向反應(yīng)的順利進(jìn)行,。
液相法和固相法是多肽合成的主要方法,。固相法具有可自動(dòng)化操作,產(chǎn)物易分離的優(yōu)勢而被更加廣泛地使用,。分為Fmoc和tBoc法,,由于前者具有更大優(yōu)勢,故如今多采用Fmoc法合成,。
基本流程:
1. 去保護(hù):Fmoc保護(hù)的柱子和單體必須用一種堿性溶劑(piperidine)去除氨基的保護(hù)基團(tuán),。
2. 激活和交聯(lián):下一個(gè)氨基酸的羧基被一種活化劑所活化?;罨膯误w與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián),,形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應(yīng)完成,。循環(huán):這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到合成完成,。
3. 洗脫和脫保護(hù):多肽從柱上洗脫下來,其保護(hù)基團(tuán)被一種脫保護(hù)劑(TFA)洗脫和脫保護(hù),。
多肽的修飾
多肽修飾是改變肽鏈主鏈結(jié)構(gòu)和側(cè)鏈基團(tuán)的重要手段,。多肽修飾的方法主要分為液相法和固相法。常見的多肽修飾是乙酰化,,烷基化,,生物素修飾,磷酸化或磺酸化等,。具體修飾原理以組蛋白的乙?;癁槔?/span>
組蛋白中賴氨酸的N端殘基可發(fā)生乙酰化,,且可逆,。在乙?;D(zhuǎn)移酶的作用下,,在賴氨酸的N短引入乙酰基,。
多肽的耦聯(lián)
多肽的偶聯(lián)有三種方式:偶聯(lián)在多肽的N端的氨基酸上,;偶聯(lián)在多肽的C端氨基酸上;偶聯(lián)在多肽序列中的半胱氨酸上,。
用于與多肽耦聯(lián)的載體蛋白有多種,,其中常用的是keyhole limpethemacyanin (KLH),牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA),卵清蛋白(ovalbumin,,OVA)和牛甲狀腺球蛋白(bovine thyroglobulin,,THY)。KLH具有更高的抗原性,,是常用的多肽耦聯(lián)載體,。
EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehydrochloride)或carbodiimide方法是將多肽和載體耦聯(lián)的常用方法。Carbodiimides能激活天冬酰胺酸及谷氨酸的側(cè)鏈羧基集團(tuán)及末端羧基集團(tuán),,使之與主胺基發(fā)生耦聯(lián)反應(yīng),。激活的多肽與載體蛋白混合而產(chǎn)生終的共軛體。如果載體蛋白先被激活,,EDC方法則通過N-末端alpha-氨基,,或者,如果序列中有賴氨酸的話,,則可以通過賴氨酸的側(cè)鏈氨基與載體蛋白耦聯(lián),。