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北京華新 BIO-rad BIO-rad 北京代理

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1653304 CASTING FRAME,,M-P3    bio-rad

1653311 OUT Glass PLT W/1mm  SP,5, M-P3 bio-rad

1653308 INNER GLASS PLATE,5,M-P3      bio-rad

1863009 DG8 gaskets for ddPCR, includes 1 package of 24 gaskets     bio-rad

165-2089      0.1cm間距電擊杯 bio-rad

1652088 電擊杯    BIO-RAD

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趨化因子( chemokines) 是一類對血細(xì)胞遷移和聚集有調(diào)節(jié)作用的小分子多肽, 趨化因子及其受體在腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和免疫逃逸以及自身免疫疾病中中發(fā)揮重要作用,。作為炎性微環(huán)境中的主要組分,,趨化因子在調(diào)節(jié)腫瘤/免疫細(xì)胞和正常組織細(xì)胞的平衡中起重要作用,。對于不同腫瘤生長、侵襲,、轉(zhuǎn)移及免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的趨化因子及其受體的研究也日益增多,。選擇一款給力的多因子篩選工具,幫助您迅速出腫瘤免疫相關(guān)趨化因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò),。

僅需 10-12.5 ul 樣本即可完成 30-40 種不同趨化因子的篩選

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DNA 甲基化研究,,進(jìn)來了解一下~

DNA 甲基化(DNA methylation)是 DNA 修飾途徑之一,即在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,,DNA 的 CpG 兩個核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基,,形成 5-甲基胞嘧啶(5-mC)。目前有大量研究證實,,DNA 甲基化異常往往會引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu),、DNA 穩(wěn)定性等發(fā)生改變,抑制相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控導(dǎo)致疾病發(fā)生,,如腫瘤,、血管類疾病、神經(jīng)紊亂等,。DNA 甲基化狀態(tài)亦可作為疾病診斷,、監(jiān)測及預(yù)后的重要 Biomarker1,4,,5,,6。

小編粗略盤點了一下目前常用的幾種 DNA CpG 甲基化檢測方法,,下面進(jìn)入掃盲時刻:

亞硫酸氫鹽處理+測序(BSP):經(jīng)過亞硫酸氫鹽處理后,,未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變,;通過 PCR 擴增目的片段,,并對產(chǎn)物進(jìn)行測序,將序列與未經(jīng)處理的序列進(jìn)行比較,,判斷 CpG 位點是否發(fā)生甲基化,。

甲基化特異性 PCR(MS-PCR):在亞硫酸氫鹽處理后,使用分別針對甲基化和非甲基化的序列設(shè)計的引物開展 MS-PCR,,用電泳檢測 MSP 擴增產(chǎn)物,。若針對甲基化序列設(shè)計的引物能擴增出片段,,則說明該檢測位點存在甲基化,;反之則則說明該檢測位點不存在甲基化。

甲基化敏感性限制性內(nèi)切酶法(MSRE):基于甲基化敏感 Ⅱ 型限制性內(nèi)切酶不能切割含有一個或多個甲基化切點序列的基本原理,,酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離,,探針雜交,,掃描定量后得出原樣本中甲基化的比例。

甲基化敏感性高分辨率熔解曲線法(MS-HRM):經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后,,甲基化與未甲基化 DNA 存在序列差異,,可通過熔解溫度及峰型的變化區(qū)分*甲基化、*非甲基化或雜合甲基化,。

焦磷酸測序(Pyrosequencing):基于引物延伸的焦磷酸測序技術(shù),,通過將鏈合成過程中釋放出的焦磷酸(PPi)轉(zhuǎn)化成光信號, 轉(zhuǎn)換成一個峰值,,其高度與核苷酸數(shù)目成正比,。經(jīng)重亞硫酸鹽處理的序列可看作是 C>T SNP 位點。因此可憑借信號峰值高低來確定甲基化狀態(tài),。

熒光定量法(Methylight):利用亞硫酸氫鹽處理 DNA 樣本,,設(shè)計分別針對待測序列甲基化和非甲基化狀態(tài)的 Taqman 探針和引物進(jìn)行熒光 PCR 擴增,以區(qū)分 CpG 甲基化和非甲基化狀態(tài),。

上述幾種方法各有優(yōu)缺點,,比如 BSP,結(jié)果可靠,,度高,,但需要大量的克隆,操作過程繁瑣,;MSRE,,需要找到合適的酶切位點,受轉(zhuǎn)化不*影響,;MS-HRM,,對儀器要求高,需要有 HRM 模塊的熒光定量 PCR 儀(Bio-Rad 定量儀器均有此功能),;Pyrosequencing,,過程復(fù)雜。

除此之外,,還有高通量檢測技術(shù),,如質(zhì)譜、靶向測序,、illumina450k,、850k 芯片、Pacific Bioscience 的 SMRT 測序,、Oxford Nanopore 測序等,。

QX200 微滴式數(shù)字 PCR(ddPCR)技術(shù)以分子計數(shù)的方式實現(xiàn)對靶標(biāo)核酸序列的定量而不依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線,且檢測的靈敏度,、重復(fù)性和準(zhǔn)確性有很大提高,。ddPCR 技術(shù)在癌癥分子標(biāo)志物發(fā)現(xiàn),、病毒載量分析、傳染病研究,、基因組結(jié)構(gòu)變異及 NGS 文庫定量等方面得到廣泛應(yīng)用,。

 而在 DNA甲基化研究方面 ddPCR 靈敏度更高,能在高豐度非甲基化背景下檢測出甲基化序列,,耐受前期處理帶來的 PCR 抑制物的干擾,,提高靈敏度,而且還能準(zhǔn)確定量,。

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BIO-rad代理 北京華新康信生物科技有限公司,。

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